改良BCA蛋白检测试剂盒 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖改良BCA蛋白检测试剂盒 蛋白质研究在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：改良BCA蛋白检测试剂盒 蛋白质研究
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Protein Quantitation Kit By BCA
编号：ALH371
本试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

试剂盒组份(500次)：
蛋白标准（5mg/mlBSA）—————0.5ml
溶液A—————————————50ml×2
溶液B—————————————2ml

产品特点：
1.步骤简单，45分钟内完成测定，比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

注意事项
1. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
2. 溶液A和溶液B混合成工作液时可能会有浑浊，但充分振荡混匀后就会消失，成为淡绿色的透明溶液。
3. 需酶标仪一台，测定波长为540-590nm 之间，562nm 最佳；需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A 液，B 液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
4. BCA 蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保无EGTA，EDTA 低于10mM，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA
法时建议使用Bradford 法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
5. 为了加快BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
6. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford 法蛋白定量试剂盒。

储存条件：-20℃，有效期1年。

本品别名：改良BCA法蛋白定量试剂盒|BCA法蛋白浓度测定试剂盒|BCA法蛋白浓度检测试剂盒|改良BCA蛋白检测试剂盒

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亮*酸脱*酶 TBAI 9082-71-7
ARB10070 人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)含量测试 Human cyclic amp response element binding protein,creb ELISA KIT
BL0787 人IgG抗原(干粉)
SJ0736 大鼠粒细胞分离液
RNase&DNase清除剂 Triton x-405
荧光素酶 Sodium phosphotungstate 9014-00-0
144-48-9 Iodoacetamide  碘代乙酰胺
ELISA稀释液   100ml
BTN130423 Q交换介质 Q Medium
ARB10973 人免疫球蛋白G(IgG)酶免分析 Human immunoglobulin g,IgG ELISA KIT
PY01-092  木糖醇  100克  
ARB13168 小鼠热休克蛋白90(HSP-90)免费代测 Mouse heat shock protein 90,hsp-90 ELISA KIT
ARB11748 人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员12(EAR12)酶联免疫定量检测 Human eosinophIL-associated ribonuclease a family member 12,ear12 ELISA KIT
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·动植物基因组DNA快速提取试剂盒
编号：ALH130
英文名称：Genomic DNA extraction kit
规格：50次|100次|200次
本试剂盒适用于快速提取全血、各种动植物组织细胞基因组DNA，采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份（50次）：
裂解液TL———————————20ml
缓冲液BB———————————20ml
结合液CB———————————30ml
抑制物去除液IR————————50ml
漂洗液WB———————————25ml
洗脱缓冲液EB—————————15ml
蛋白酶K ———————————40mg
吸附柱AC———————————100个
收集管(2ml) —————————100个

产品特点：
1.不需要使用有毒的*酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3～6µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb～50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
4.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。
5.典型的产量200µl全血可提取出3-6µg 基因组DNA。

注意事项：
1. 所有的离心均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 需要自备1XPBS(磷酸盐缓冲液),和异丙醇。
3. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
4. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
5. 为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3 天的标本，不要使用反复冻融超过3 次的标本，否则会严重降低产量。

储存条件：室温，有效期12个月。


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·通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I)
编号：ALH033
英文名称：Universal Plant RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒适用于快速提取植物组织RNA，使用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，DNase直接在柱上消化残留DNA，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的Beta-巯基乙醇，*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
3.配套DNase I 柱上消化，得到的RNA不残留DNase消化，可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
4.世界领先，是同类产品中适应性最广泛的试剂盒，可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.2，无DNA残留,可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。

试剂盒组份：

 

组份	50次
裂解液RPA	50ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	10ml
RNase-freeH2O	10ml
DNaseBuffer	1.25ml×2/td>
Rnase free DNaseI	0.25ml
吸附柱和收集管	50套

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
2. 需要自备乙醇，研钵(可选)。
3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶加入指定量无水乙醇!

1. 直接研磨法（推荐）:
a. 新鲜植物组织称重后取100mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg 放入研钵）， 加入1 ml 裂解液RPA 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA 立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15 秒，13,000rpm 离心5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
c. 取480μl 裂解物上清（在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
d. 立刻接操作步骤的步骤3。

2. 液氮研磨法:
a. 取500μl 裂解液RPA，转入1.5ml 离心管中。
b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取50mg 细粉转入上述装有RPA 的离心管, 立即用手剧烈振荡20 秒，充分裂解。
c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。
d. 将裂解物13000rpm 离心5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
e. 取裂解物上清（在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
f. 立刻接操作步骤的步骤3。
注意：以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理，可以提高产量。也就是使用1ml 的裂解液RPA和100mg的样品。

3. 将混合物(每次小于720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 离心2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。

4. 加350μl 去蛋白液RW1，室温放置1 分钟，13,000rpm 离心30 秒，弃掉废液。

5. DNase I 工作液配制：取45μl DNase I buffer 和5μl RNase free DNase I 在离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。

6. 向吸附柱 中央加入50μl 的DNase I 工作液，室温（20-30℃）放置15 分钟。
注意：直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O 型圈或是离心柱管壁上。

7. 向吸附柱 中加入350μl 去蛋白液RW1， 12000rpm 离心30 秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

8. 加入500μl 漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13000rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl 漂洗液RW，重复一遍。

9. 将吸附柱 放回空收集管中，13000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱，放入一个RNase free 离心管中，根据预期RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1 分钟，12000rpm 离心1 分钟。

11. 如果预期RNA 产量>30μg，加30-50μl RNase free water 重复步骤10，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA 浓度高)。

洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

注意：如果不需要做荧光定量PCR，仅仅做普通的反转录，克隆基因片段，可以省略DNA 酶柱上消化的步骤，具体就是第4 步骤的“加350μl 去蛋白液RW1”改成“加700μl 去蛋白液RW1”，同时省略步骤5，6，7。

储存条件：室温，有效期12个月(DNase I及其Buffer需-20℃保存)

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