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文献和实验脾脏(spleen)位于上腹部左后侧,体积较大,长条形,是体内最大的淋巴器官,也是血流通路中的过滤器官。脾脏内定居着大量的淋巴细胞和其它免疫细胞,是机体发生特异性免疫应答的场所。 1 原理 单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同,在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。 2 方法 1)无菌条件下取出脾脏,在培养皿中加入适量的分离液,将脾脏放入细胞筛中,置于分离液中进行研磨(具体
的全血单个核细胞中富集细胞。 SpinSep® 富集细胞不需要借助红细胞。针对非靶细胞的单抗混合物直接加入到细胞悬液中,再加入特殊设计的密度粒子,这些粒子选择性地与单抗标记的非靶细胞结合,从而增加了这些细胞的密度;通过使用特殊配制的SpinSep® 密度梯度液离心,分离获得所需的靶细胞。由于是负分选,因此,收集的靶细胞未被任何单抗标记过。 为什么选用SpinSep® ? 1、快速,只需1小时。 2、简单,将抗体直接加入全血或脾脏/骨髓细胞悬液中。 3、负选,需要的细胞没被标记
细胞。 4. 从动物脾脏组织分离淋巴细胞应如何操作? 答:取动物脾脏组织时,应注意取材的无菌操作。分离出脾脏组织,研磨后过200目筛网,保证所分离的细胞为单个细胞悬液。获得细胞悬液后应该使用相应的淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞。 5. 在ELISPOT板上,每孔我应该放置多少数目的淋巴细胞? 答:在使用ConA,PHA等阳性刺激孔中,一般放置的淋巴细胞数为 104
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