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名称:猪骨髓单核细胞分离液价格
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文献和实验流式课堂 | 裂红 or 分离液?外周血不同制备方法应用场景
、粒细胞等),需要裂解红细胞;倘若检测的是红细胞,不需要裂解红细胞; ⊙ 如果后续样本不用于流式分析,而是需要培养或者冻存复苏,使用裂红后培养的细胞,活性可能会打折扣。 Ficoll 密度梯度离心法 01 原理 根据细胞的沉降系数差异,借助细胞分离液和离心操作,对细胞进行分离。 02 优点 ⊙ 获得的细胞更纯净,有利于细胞培养后检测胞内因子 ⊙ 可将细胞冻存后再复苏、培养、检测 ⊙ 去除死细胞 03 缺点 ⊙ 步骤复杂,需 30min 以上 ⊙ 取白膜层需要丰富的经验 ⊙ 只能获得淋巴细胞和单核细胞
核细胞分离开来。 Ficoll密度梯度离心法是分离、纯化PBMC最常用的方法。Ficoll是蔗糖的多聚体,中性,平均分子量400000,当密度为1.2g/mL,未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜,故常用作PBMC分离的分离液。红细胞、粒细胞比重大,离心后沉于管底;淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重,离心后漂浮于分离液的液面上,也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分层液液面上的白膜层细胞,并进行适当的清洗,就可从外周血中分离到较高纯度的单个核细胞,即PBMC。 2 方法 1) 取新鲜抗凝
到离心机,500 g 离心 25 min。 小心取出离心管,吸取中间层的白色薄膜层,即为单个核细胞。 用 10 mL PBS 洗涤获得的单个核细胞,250g 离心 10 min,弃上清。 重复洗涤一次。 用细胞染色缓冲液重悬细胞备用。 注意事项: Ficoll 使用时的温度很重要,温度太高或者太低都会影响分离效果。 血液样本最好为新鲜抗凝血(采血 2 h 以内),为保持细胞活力,应避免冷冻和冷藏。 3.50 mL 离心管离心效率比 15 mL 离心管差,为了获得最大量的单核细胞,最好用15
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