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- 2025年11月03日
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北京诺博莱德科技有限公司
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| 钙盐染色液(Von Kossa硝酸银法) |
钙在人体内大量存在，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。钙在机体内以两种形式存在，一种是离子钙，存在血液循环内，即所谓血钙；另一种是结合钙，和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内。除骨骼和牙齿外，正常时钙渗透在所有组织和细胞中，一般不以固体状态出现在组织内。但在某些情冴下，钙析出成固体并沉着于组织内，则为病理性钙盐沉着。沉着的钙盐主要是磷酸钙，其次为碳酸钙。钙盐通常是单折射的，但草酸钙是双折射的。当使用 HE 染色时，钙一般呈紫蓝色。许多染料可以于钙形成螯合物，包括茜素红 S、红紫素、核固红等。茜素红 S 属一种蒽醌类衍生物，是茜素磺酸钠盐，它能不碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物。
钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红 S 法， 钙盐染色液采用 Von Kossa 硝酸银法，其原理在于该法是一种金属置换法，硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时，钙被银所置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，适用于大量样本的钙盐组织染色。
产品组成：
| 编号 名称 |
D6203 2×50ml |
Storage |
| 试剂(A): Von Kossa 硝酸银溶液 | 50ml | RT避光 |
| 试剂(B): 海波溶液 | 50ml | RT |
| 试剂(C): Von Kossa 对照液 | 10ml | RT |
| 使用说明书 | 1 份 | |
1、10%中性福尔马林固定液
2、系列乙醇
3、蒸馏水
4、显微镜
钙盐染色液(Von Kossa硝酸银法) 操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定于 10%中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、切片厚度 5μ m，常规脱蜡至水。
3、蒸馏水洗 1min。
4、切片入 Von Kossa 硝酸银溶液，强光照射 15~60min(见注意事项 2)。
5、蒸馏水洗 1min。
6、入海波溶液处理 2min。
7、HE 染色液或 Van Gieson 复染细胞核。
8、常规脱水透明，中性树胶封固
染色结果：
| 钙盐 | 黑褐色至深黑色 |
| 细胞核 | 根据复染液不同而不同 |
| 背景 | 红色 |
1、如有必要，可做阴性对照。取另外一张连续切片脱蜡至水，置于 Von Kossa 对照液处理20min，流水冲洗 5min。不试验片一同入 Von Kossa 硝酸银溶液，余下步骤同上，结果为阴性。
注意事项：
1、钙盐组织固定以中性福尔马林为佳，不宜采用 Bouin 液等酸性固定液和甲醛钙固定液。如用常规的 10%福尔马林固定，固定 4～6h 后即可进行脱水包埋，以防止固定液酸化导致钙盐溶解。
2、作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间。如暴露于强光下，15min 已经足够；如暴露于紫外灯下，10min 即可；如暴露于一般光线下，宜适当延长曝光时间。
3、该染色法可以区分尿酸盐和钙盐，其原理在于钙盐不溶解于碳酸锂溶液，尿酸盐易溶解于碳酸锂溶液，切片经碳酸锂处理后，入硝酸银溶液并置于强光下，尿酸盐呈阴性反应。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
钙盐染色液(Von Kossa硝酸银法) 有效期：6个月有效。
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文献和实验中央共5 个部位100 个细胞)。按公式:细胞碱性磷酸酶染色阳性率= 染色阳性细胞数/600 ,分别计算出成骨细胞、骨髓基质干细胞、混合培养细胞染色阳性率。 1 .2 .3 .4 单位面积细胞形成钙结节计数 将未放入玻片的细胞继续进行不传代培养,至21 d 时行von kossa染色,计数瓶壁四角及中央4 处共8个０.5 cm×0 .5cm 小方格内细胞形成的钙结节数目,按公式:钙结节数= 细胞在8 个小方格内形成的钙结节总数/8 ,求出成骨细胞、骨髓基质干细胞、混合培养细胞形成的平均钙结节
1 School of Chemistry, University of Bristol, Bristol BS8 1TS, United Kingdom 2 cole Normale Suprieure 45, rue d’Ulm, F-75230 Paris Cedex 05, France 3 Max-Von-Laue-Paul-Langevin, BP 156-X, F-38042 Grenoble Cedex, France
. 3rd, et al. (2003) Identification of 2D-gel proteins: acomparison of M A L D I / T O F peptide mass mapping to m u L C - E S I tandem massspectrometry. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1 4 , 957-970. 11. Schagger, H. and von Jagow, G. (1991) Blue
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