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- 上海彩佑实业有限公司
- 上海
- IEC-18
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 细胞类型：
见说明书
- 组织来源：
human rb
- 物种来源：
人，大小鼠
- 免疫类型：
见说明书
- 细胞形态：
贴壁或悬浮
- 运输方式：
低温运输
- 年限：
5年
- 生长状态：
见说明书
- 规格：
株
2、生长特性：贴壁,悬浮,半悬浮半贴壁
3、细胞生长条件：
培养条件:640+10%FBS+1%双抗
温度:37℃
空气条件:5% CO2，,95% AIR
传代方法:1:2传代，2~3天换液
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
二．大鼠回肠细胞使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
大鼠回肠细胞注意事项
培养瓶里的培养基血清浓度为5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基。（这里是针对原来完全培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度） 收到细胞后如细胞状态不佳或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系并提供图片，以便售后处理。7天内反馈，细胞本身问题免费重发如人为原因导致可根据实际情况酌情处理；7天内未接到任何反馈视为合格，不予免费售后
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对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但也很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。 在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。 所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。 所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少
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