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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
贮存温度:2~8℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
WB blocking solution
- 库存:
大量供应
- 供应商:
上海雅吉生物科技有限公司
- 规格:
50T/595T
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取样本量100ul。
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.7%。
5、回收试验: X =103.3%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
7、测试面广:可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等,效果均佳。
WB封闭液(脱脂奶粉)所需仪器及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为636nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理:
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程:
1、酶促反应:按说明操作加入样本100l和混合试剂,37℃准确反应10分钟
2、加R7,3500转/分,离心10分钟,取上清
3、定磷:取上清液加入定磷剂,室温静置2分钟加终止剂
4、636nm波长,1cm光径,比色
技术参数:
本试剂盒保存期:6个月。贮存温度:2~8℃,特别提醒R4需放在-20℃以下冷冻保存。
参考文献:
1. Kok Poh Loh, Jia Qi, Benny Kwong Huat Tan, et al. Leonurine Protects Middle Cerebral Artery Occluded Rats Through Antioxidant Effect and Regulation of Mitochondrial Function. Stroke, 2010, 41:2661-2668.
2. Lei Liu, Yan Liu, Jie Cui, et al. Oxidative stress induces gastric submucosal arteriolar dysfunction in the elderly. World J Gastroenterol, 2013,19(48): 9439-9446.
3. Qifeng Zhao, Lan Shao, Xingti Hu, et al. Lipoxin A4 Preconditioning and Postconditioning Protect Myocardial Ischemia/Reperfusion Injury in Rats. Mediators of Inflammation, Volume 2013, Article ID 23135, http://dx.doi.org/10.1155/2013/231351.
4. Gen-Xiang Mao, Ling-Di Zheng, Yong-Bao Cao, et al. Antiaging Effect of Pine Pollen in Human Diploid Fibroblasts and in a Mouse Model Induced by D-Galactose. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, Volume 2012, Article ID 750963. doi:10.1155/2012/750963.
5. Shao-Hua Liu, Ke Ma, Xin-Rong Xu, et al. A single dose of carbon monoxide intraperitoneal administration protects rat intestine from injury induced by lipopolysaccharide. Cell Stress and Chaperones, 2010,15:717-727.
6. Chunpeng Zhu, Wei Hu, Hao Wu, et al. No evident dose-response relationship between cellular ROS level and its cytotoxicity ― a paradoxical issue in ROS-based cancer therapy. Sci Rep. 2014, 4:5029. doi: 10.1038/srep05029.
7. Hong-Xia Li, Yu Xiao, Ling-Ling Cao, et al. Cerebroside C Increases Tolerance to Chilling Injury and Alters Lipid Composition in Wheat Roots. PLoS ONE, 2013, 8(9): e73380. doi:10.1371/journal.pone.0073380.
8. Yan Deng, Wei Wang, Pingfeng Yu, et al. Comparison of taurine, GABA, Glu, and Asp as scavengers of malondialdehyde in vitro and in vivo. Nanoscale Research Letters, 2013, 8:190.
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文献和实验封闭,就会背景脏得不得了。还有一点就是脱脂奶粉的 IgG 能和抗山羊的二抗有交叉反应……所以……第二种封闭液就是 BSA,这个相对来说贵一些,一般会用于一些磷酸化的 WB 里。但是,有些 BSA 偶联的多肽要做 WB 的话,就绝对不能用 BSA 作为封闭液。第三种封闭液估计你们不会特别常用,其实就是吉利丁,做过布丁或者慕斯蛋糕的同学可能知道这是啥。其实就是 Fish Gelatin,鱼明胶,但是这种封闭液成分价钱很傲娇,所以平时没什么人会使用这个。还有一种比较常用的封闭液,就是 0.25 - 2%
① 膜封闭时间不够,室温下通常摇床孵育膜 1h,出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间; ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高,可以多设置几组一抗浓度,摸索最适宜的抗体稀释度; ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况,因此实验过程中要注意保持膜的湿润,使用镊子夹取膜。 3、WB 结果中有杂带干扰 ① 抗体纯度不高会产生非特异性条带影响结果,高纯度抗体条带特异性更好,建议更换抗体; ② 一抗浓度过高,降低一抗稀释比,目的条带和杂带可能会减弱
。下面是来自使用者的反馈数据: 1、蛋白含量低,得到的WB信号弱--SignalBoostTM可以增强信号,检测到低丰度蛋白: 样品:K562细胞全细胞裂解液。 (Lane 1: 25μg总蛋白;Lane 2: 5μg总蛋白;Lane 3: 2.5μg总蛋白) 一抗:anti-PKC(Ab-2)小鼠单抗(MC5)(货号OP74),分别用5%脱脂奶粉PBST溶液(图A)和SignalBoost Solution 1(图B)按照1:1000比例稀释。 二抗:Rabbit anti
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