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文献和实验到血的下面。这种方法对血的扰动较小,比将全血加到Ficoll上面为好。加完后,可以清楚看到Ficoll与全血之间有一明显的分界线。注意在Ficoll快加完时应特别小心,否则有可能加入气泡搅混血样,使血与分离液混合,达不到分离的目的。 ③离心350~400g,30min。红细胞、粒细胞以及死细胞将位于离心管底部,中间层的单个核细胞为淋巴细胞、单核细胞和一些血小板。 ④取出中间层中所有细胞,若在Ficoll中还有细胞也要取出,这也是单个核细胞(PBMC)。 ⑤用PBS洗3次
εRⅡ/CD23。1986年Kikutani在人、1988和1989年Waldschmidt等在小鼠用单克隆抗体证明。sIgM+和sIgD+的B细胞90%以上表达FCεRⅡ,而sIgG+和sIgA+的B细胞则不表达FCεRⅡ。正常人外周血B细胞大多为FCεRⅡ阳性,过敏病人的B细胞和单核细胞表达FCεRⅡ大量增加。1987年有两个研究组均证实,FCεRⅡ就是人B细胞表面分化抗原CD23,是B细胞早期的表面标志,故多以FCεRⅡ/CD23表示之。IL-4能增加上述细胞FCεRⅡ/CD23的表达
,不过非特异性会要高一点。 解决方法:摸索一下一抗和二抗的浓度,二抗千万不能加太多。洗涤步骤要严格,加完一抗和二抗后都要洗三遍,在EP管中进行,在96孔板里虽快,但非特异性会比较高;一抗冰浴30分,二抗冰浴20分钟染色。 25、JC-1测淋巴细胞线粒体膜电位问题: 问:我想用JC-1测外周血淋巴细胞线粒体膜电位,国内有文章说: (1)用5ml注射器抽取适量肝素,再抽取患者静脉血2.5ml,PBS溶液稀释一倍,沿装有等量淋巴细胞分离液的试管管壁缓慢加至液面上层,保持两液面清晰,2000转/分离心20
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