RFT181型青链霉素溶液(100×)厂商

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名称：RFT181型青链霉素溶液(100×)厂商
编号：RFT181
产地：国产|进口
规格：100ml
英文名：Penicillin-Streptomycin Solution
青霉素-链霉素溶液(100×)是专门用于细胞培养的双抗，经过过滤除菌，可以直接添加到细胞培养液内。一个包装即100ml青霉素-链霉素溶液(100×)可以配制10L细胞培养液。

青霉素-链霉素溶液(100×)中，青霉素的含量为10KU/ml，链霉素的含量为10mg/ml。该溶液用0.85%*化*配制。在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml，即按照100倍稀释使用即可。

使用方法：
1、在无菌的细胞培养液中直接添加青霉素-链霉素溶液(100X)，比如按照每500ml细胞培养液添加5ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X)，混匀即可使用。
2、配制细胞培养液时加入青霉素-链霉素溶液(100X)，然后再过滤除菌。配制细胞培养液时按照每配制1L细胞培养液加入10ml的比例加入青霉素-链霉素溶液(100X)，配制完成后过滤除菌即可使用。

储存条件：-20℃。

欲咨询购买RFT181型青链霉素溶液(100×)厂商，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
ARB10293 人己糖激酶(HK)血清中含量检测 Human hexokinase,hk ELISA KIT
海因 Ficoll70 461-72-3
甲醛缓冲吸收液  100× 100ml|500ml
72-19-5 L-Threonine L-苏*酸
硫*(代"酸")奎宁一水物 L-Norleucine 6119-70-6
N-*基代邻*基*甲*(代"酸") TEMPO 91-40-7
SM缓冲液   100ml|500ml
ARB10860 人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)含量检测 Human neuronal nuclear autoantibody,anna-1/hu ELISA KIT
花宝1号 α-Amylase from Aspergillus oryzae
F040108 鸡卵清蛋白偶联莱克多巴胺 OVA-RAC
碘化银 Pluronic F-68 7783-96-2
PY02-049  7.5%*化*肉汤  250克  
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·2×SYBR qPCR MasterMix
编号：RFT094
规格：1ml|5×1ml|20×1ml
本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。已经将 Hot-Start DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液和 SYBR? Green I 等试剂预混成一种适合 Real Time PCR反应检测用 2×MasterMix试剂，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板、引物和水，便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对目的基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。以50μl qPCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，1ml可做40次 50μl qPCR反应。

使用方法：
1、冰浴中彻底融化2×qMasterMix，彻底混匀后快甩离心将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

	50μl反应体系	20μl反应体系	终浓度
2×qPCR MasterMix	25μl	10μl	1×
上游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
下游引物 10μM	1μl	0.4μl	0.2μM
ROX Slolution I or II(50×)	1μl or 不加	0.4μl or 不加	x
模板	×μl	xμl	10pg-100ng
水	补至50μl	补至20μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、检测片段大于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(三步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15sec	40
退火	55℃	30sec
延伸	72℃	30sec

检测片段小于300bp，qPCR仪上推荐执行以下程序(两步法)：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	95℃	10min*	1
变性	95℃	15 sec	40
退火和延伸	60℃	60 sec

注：由于本MasterMix中的Hot-start DNA聚合酶是经过化学修饰封闭的，初始变性95℃ 10分钟是必须的，时间过短会降低酶的活性。

实验结果分析
反应结束后加做融解曲线，以区分扩增产物及引物二聚体。根据扩增曲线和融解解曲线结果可进行PCR定量标准曲线的制作。

注意事项
1、本制品中不含内参染料ROX，ROX染料单独供应。客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
2、本制品含SYBR Green I，强光下易分解，使用时避免长时间强光照射本制品。
3、建议在冰上配制qPCR反应液，再放入qPCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。
4、-20℃下保存时间较长，有微量沉淀产生，充分混匀后不影响使用。本制品已经优化了反应缓冲液中的Mg2+浓度，无需再调节Mg2+浓度。
5、模板DNA：用本产品，cDNA、基因组DNA、质粒DNA、病毒DNA等都可作为模板。在添加DNA模板时请注意模板量对PCR扩增的影响。本产品建议添加量为：cDNA添加量不应超过总反应体系的10%；基因组DNA为模板时，为避免在高浓度区域出现线性差的情况，请注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作为PCR模板，添加时请以300ng为上限；由于质粒DNA浓度和拷贝数很高，在添加PCR模板之前最好进行稀释梯度试验，以便确定合适的质粒DNA拷贝数。
6、引物：
建议每条引物工作浓度200 nM～800 nM；为得到高灵敏度定量性的数据，引物的设计非常重要。以下列举了设计引物时需注意的一般事项。
a.引物长度请设定为18bp～30bp、GC含量为40%～65%；
b.扩增片段一般小于300bp，如可能请尽量设定在80bp～150bp。过长的片段容易导致扩增效率降低；
c.如设计mRNA为目的片段的引物，设计应尽量横跨内含子，以防止基因组DNA的扩增而引起假阳性；
d.请尽量选择Tm为65℃～67℃；
e.A、G、C、T整体分布尽量均匀。不要有部分的GC rich或AT rich(特别是3"端)。避开T/C(Polypyrimidine)或A/G(Polypurine)的连续结构；
f.避开引物内部或两条引物之间有3个碱基以上的互补序列。二条引物间的3"末端避开有2个碱基以上的互补序列；
g.引物设计完成后要使用BLAST检索确认引物的特异性。
此外，引物的纯化纯度对反应特异性有很大的影响。经过一般纯化、纯度较低的引物荧光强度散乱，容易产生非特异性产物，致使熔解曲线出现杂峰。请尽可能使用HPLC级别纯化，至少要用经Cartridge(OPC)级别以上纯化的引物。
7、对照设计：
a.No template control(NTC)：在qPCR反应体系中仅仅缺少模板。用以检测有无二聚体和试剂有无污染。
b.Reverse Transcripase control：用以评估逆转录反应中有无基因组DNA的污染。在逆转录反应中仅仅不含有逆转录酶。

常见问题及处理：

问题	可能原因	推荐的解决方法
无扩增曲线且无扩增产物(凝胶电泳)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA。
	引物设计不合理	重新设计、合成引物。
	逆转录产物体积过量	减少逆转录产物量以不超过反应体系的10%。
	加样错误或有试剂未加	检查是否加了所有的所需试剂。
	引物的降解	通过PAGE电泳检测引物完整性。
	退火温度不正确	优化退火温度。
无扩增曲线但有扩增产物(凝胶电泳)	qPCR仪设置不正确	检查dye selction，reference dye是否选择正确
	失效的荧光检测	荧光检测应在PCR循环的退火/延伸阶段。
	荧光PCR仪问题	参考qPCR仪器说明书
阴性对照(NTC)有扩增曲线
	反应体系中有污染	qPCR片段较小，极易造成环境中气溶胶污染。如果融解曲线分析，解链温度和目的片段相同，凝胶电泳中NTC中的片段大小和目的片段相同，极有可能是反应体系中某一或某些试剂污染所引起的。建议换至没有污染源的环境进行PCR体系的配制。
	引物二聚体	进行溶解曲线分析，如果扩增曲线的解链温度小于80℃，凝胶电泳片段大小和目的片度不符。请重新设计引物。
		提高退火温度3℃。
PCR效率高于110%(斜率>-3.1)	有非特异性扩增	溶解曲线分析非特异性扩增；优化引物设计
PCR扩增效率低于90%(斜率<-3.6)	反应体系中有PCR反应抑制剂	更换或纯化模板DNA
	PCR扩增条件不合适引起扩增效率降低。	确认引物浓度。注意qPCR Master Mix是否失效。
	引物设计	重新设计引物，避免扩增区域的DNA二级结构。
实时荧光曲线线性不好	模板DNA含量较低或过高	应调整样品的DNA浓度。
	模板DNA中含有抑制PCR扩增反应的物质	对模板DNA进行纯化或更换模板。
	质量不好的逆转录试剂盒合成的cDNA，逆转录反应液中所含的物质可能抑制PCR反应。	请降低样品浓度，或将样品纯化后再进行反应。建议使用品牌质量较好的cDNA合成逆转录试剂盒。
CT值高于预期值	加入的模板量太少	适当增加模板量。
	样品被降解	检查样品的完整性。
	引物不合适	重新设计合成引物。
CT值低于预期值	加入了过多的模板	减少模板量。
	PCR产物太长	一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp
CT值的标准差>0.16	取样不准确	每种样品的反应混合液单独配制，充分混匀；
		qPCR之前要离心，管壁不要沾有反应液。
ΔRn值太小	PCR效率太低	优化PCR反应条件。
	目标模板数太低	增加模板量。
扩增曲线的荧光信号弱，或扩增曲线呈锯齿状	ROX添加量太大	使请根据ROX使用方法和使用的PCR仪进行确定ROX的添加量。
	荧光校正错误	请联*(代"系")PCR仪器工程师或参照PCR仪器的使用说明书，进行本底和荧光校正。
	PCR的延伸时间过短即荧光读取时间不充分，荧光收集不能充分完成。	适当增加延伸时间。
	以少于PCR仪器标准条件的反应体积进行扩增，荧光收集量的误差会增大	应增加反应体积以满足PCR仪器标准。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期半年。


RFT181型青链霉素溶液(100×)厂商关键词：Penicillin-Streptomycin Solution,RFT181,100×,青链霉素溶液,青链霉素溶液(100×)
  青链霉素溶液(100×)等试剂产品的使用注意事项：
（1）、所有试剂、溶液以及样品的包装上必须要有标签。标签要完整、清晰，表明试剂的名称、规格、质量。
（2）、溶液除了表明品名外，还应表明浓度、配置日期等。万一标签脱落，应照原样贴牢。决定不允许在容器内装入与标签不相符的物品。
（3）、无标签的试剂必须取小样检定后才可使用。不能使用的化学试剂要慎重处理，不能随意乱倒。为了保证试剂不受污染，应当用清洁的牛角勺或不锈钢小勺从试剂瓶中取出试剂，绝不可以用手抓取。若试剂结块，可用洁净的玻璃棒或瓷药铲将其捣碎后取出。
（4）液体试剂可用洗干净的量筒到取，不要用吸管伸入原试剂中吸取液体。从试剂瓶中取出的、没有用完的声誉药品，不可再倒回原瓶。



·即用型潮霉素B溶液
编号：RFT173
英文名称：Hygromycin B solution
规格：20ml
潮霉素B是一种由链霉菌产生的*基糖甙抗生素，通过抑制蛋白合成杀死细菌、真菌和高等真核细胞。

CAS号：31282-04-9
分子式：C20H37N3O13
分子量：527.5
浓度：50 mg/ml
纯度：80% (HPLC)

储存条件：4℃

·λ噬菌体DNA
编号：RFT118
英文名称：Lambda bacteriophage DNA
规格：100μg
本品常用于限制性内切酶的底物。

长度：48502bp
纯度：A260/A280=1.8～2.0
浓度：0.4μg/μl
分子量：31.5×10^6Da
贮存溶液：10mM Tris-HCl pH8.0，1 mM EDTA
来源：Bacteriophage λcⅠ857 Sam7

储存条件：-20℃。

·2×Long Taq PCR MasterMix
编号：RFT092
英文名称：Lambda bacteriophage DNA
规格：500μl|5×500μl
本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可最大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于短链和长链DNA扩增，特别适合于长片段DNA的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基，可以直接用于TA克隆。

质量控制：经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余基因组DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
 

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

三步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

两步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火和延伸	68℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。



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