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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖BL21(DE3)化学感受态细胞品牌在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:BL21(DE3)化学感受态细胞品牌
品牌:百奥莱博
规格:20×100μl
编号:RFT165
产地:国产|进口
英文名:BL21(DE3) Competent cell
本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108cfu/μg,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。
产品特点:
1、T7 RNA聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。
2、适用于T7、T7 lac启动子的表达系统,如pET,pEASY。
3、适用于非毒性蛋白的表达。
4、使用pUC19质粒DNA 检测,转化效率可达10^7 cfu/μg DNA。
注意事项:
1、感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免感受态细胞的转化效率。
2、进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置90秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀,吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16小时。
注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
储存条件:-70℃,有效期6个月。
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