肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELI

产品名称：肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELISA试剂盒

用途

该试剂盒用于体外定量检测.血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELISA试剂盒

需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、单道或多道微量加液器及吸头
3、稀释样品的EP 管
4、蒸馏水或去离子水
5、吸水纸
6、盛放洗液的容器

肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELISA试剂盒储存及有效期：
1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶
液A、检测溶液B 以及96 孔板保存于-20oC。
2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于
-20oC，避免潮湿。
注意：
试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1 个月内使用完毕。
产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELISA试剂盒标本的采集与保存:
1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜，然后1000×g 离心20 分钟，取上清即
可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟，
取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
3、组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后
再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充
分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融
进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。
4、细胞裂解液：
1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；
2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：
i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。
4）将标本于2-8oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。
5、细胞培养上清或其它生物标本：请1000×g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保
存，但应避免反复冻融。
注意：
1、以上标本均需密封保存，4oC 保存应小于1 周，-20oC 不应超过1 个月，-80oC 不应超过2 个月。
2、标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

肿瘤坏死因子受体超家族成员12A(TNFRSF12A)ELISA试剂盒操作步骤:

	1.Add 100 μL of standard or sample to each well.
	2.Remove the liquid.
	3.Add 100 μL Biotinylated Detection Ab. Incubate 1 hour at 37℃.Aspirate and wash 3 times.
	4.Add 100 μL HRP Conjugate. Incubate 30 min at 37℃.Aspirate and wash 5 times.
	5.Add 90 μL of Substrate Reagent. Incubate for 15 min at 37℃.
	6.Add 50 μL of Stop Solution.
	7.Read the OD at 450 nm immediately. Calculation of the results.

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