- ￥3200
- 上海彩佑
- 中国
- YS330307
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
见说明书
- 库存：
10
- 供应商：
上海彩佑
- 规格：
1 kit
【主要组成成份】
注：阴性对照为猪基因组DNA，阳性对照为失去活性的猪流行性腹泻病毒cDNA。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
| 序号 | 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| 1 | PEDV RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
| 2 | PEDV逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
| 3 | PEDV Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
| 4 | PEDV阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 5 | PEDV阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】
- 试剂准备（试剂准备区）
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
| 单反液配制表(每份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
| 逆转录酶 | 2.0 μL | |
| Taq酶 | 3.0 μL |
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
| 反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集猪流行性腹泻病毒荧光信号 |
| PCR 反应 条件 |
步骤 | 条件 | 循环数 |
| 反转录 | 42℃：10分钟（min） | 1 | |
| 预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 | |
| 预扩增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
| 55℃：40秒（s） | |||
| PCR扩增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
| 55℃：40秒（s） （此阶段结束时采集荧光信号） |
【参考值（参考范围）】
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标本结果判定：
（1）阳性：标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
（2）可疑：标本检测结果Ct值在35～38范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标本检测结果Ct值＞38或无Ct值。
【检验结果的解释】
| 通道及检测结果 | 标本检测结果解释 |
| FAM | |
| 阳性（＋） | 标本中检出猪流行性腹泻病毒RNA |
| 阴性（－） | 标本中未检出猪流行性腹泻病毒RNA |
- 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的最低检出限时可能会发生假阴性的结果。
- 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。
- 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染，则容易得到假阳性结果。
【注意事项】
- 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
- 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
- 每次实验应该设置阴、阳性对照。
- 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
- 试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
- 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
- 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
- ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
- 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
【主要组成成份】
注：阴性对照为猪基因组DNA，阳性对照为失去活性的猪流行性腹泻病毒cDNA。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
| 序号 | 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| 1 | PEDV RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
| 2 | PEDV逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
| 3 | PEDV Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
| 4 | PEDV阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 5 | PEDV阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
【检验方法】
- 试剂准备（试剂准备区）
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
| 单反液配制表(每份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
| 逆转录酶 | 2.0 μL | |
| Taq酶 | 3.0 μL |
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
| 反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集猪流行性腹泻病毒荧光信号 |
| PCR 反应 条件 |
步骤 | 条件 | 循环数 |
| 反转录 | 42℃：10分钟（min） | 1 | |
| 预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 | |
| 预扩增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
| 55℃：40秒（s） | |||
| PCR扩增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
| 55℃：40秒（s） （此阶段结束时采集荧光信号） |
【参考值（参考范围）】
1.试剂盒有效性判定：
（1）阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
（2）阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。
2.标本结果判定：
（1）阳性：标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
（2）可疑：标本检测结果Ct值在35～38范围内。此时应对标本进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在35～38范围内，有明显指数增长期，则判定为阳性，否则为阴性。
（3）阴性：标本检测结果Ct值＞38或无Ct值。
【检验结果的解释】
| 通道及检测结果 | 标本检测结果解释 |
| FAM | |
| 阳性（＋） | 标本中检出猪流行性腹泻病毒RNA |
| 阴性（－） | 标本中未检出猪流行性腹泻病毒RNA |
- 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的最低检出限时可能会发生假阴性的结果。
- 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。
- 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染，则容易得到假阳性结果。
【注意事项】
- 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
- 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
- 每次实验应该设置阴、阳性对照。
- 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
- 试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
- 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
- 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
- ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
- 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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- 内容
- 询问日期
文献和实验相关实验
11 月 13 日，首都机场出入境检验检疫局检疫人员对一批申报为「塑胶板」（申报货值 50 美元，收货人显示为北京美术学院）的快件进行查验，传说中的塑胶板长这样：此「塑胶板」实际上为 36 瓶胎牛血清、生物试剂等产品。检验检疫部门对发货和收获人的情况进行排查布控，共查获牛血清 93 瓶，其中美国牛血清 21 瓶，新西兰牛血清 1 瓶，墨西哥牛血清 1 瓶，澳大利亚牛血清 70 瓶。检验检疫部门将 4 批涉案牛血清做了相关实验室检测，结果发现牛病毒性腹泻病毒核酸阳性和抗体阳性。牛病毒性腹泻是农业
用Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit 进行荧光定量PCR后，结果如图3。 实验结论 经过不同样品的扩增后，可以看出BioTeKe公司的2×SYBR real-time PCR premixture Kit比T公司的荧光定量PCR试剂具有较高的扩增效率，在荧光值和灵敏度方面也有巨大的优势。另BioTeke公司的一步法Real-time PCR试剂盒也拥有很好的扩增效果。 同时，为了进一步证明BioTeke的实时荧光定量产品的质量，BioTeke公司
。临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足，基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下，利用现有的试剂研发平台，人感染猪流感实时荧光定量PCR诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量PCR技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前，针对猪与猪传染的传统猪流感疫情，近年来我国科技人员经过不懈努力，探索快速检测与诊断方法].人感染猪流感疫情发生后，美国疾病预防控制中心（CDC）于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南
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牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR试剂盒
￥3200
