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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 库存:
211
- 靶点:
V5-Tag
- 级别:
单克隆
- 目录编号:
SY0655
- 克隆性:
多克隆
- 保质期:
二年
- 抗体英文名:
V5-Tag, Mouse mAb
- 抗体名:
小鼠抗V5-Tag单克隆单克隆抗体
- 宿主:
小鼠
- 适应物种:
Human
- 免疫原:
V5-Tag
- 形态:
液体
- 应用范围:
WB,ELISA
- 浓度:
1mg/ml
- 保存条件:
-20℃冻存,避光
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")小鼠抗V5-Tag单克隆抗体打折促销,我公司供应的抗体抗原品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:小鼠抗V5-Tag单克隆抗体打折促销
规格:10μl(>50次)
品牌:百奥莱博
编号:SY0655
产地:国产|进口
本品为小鼠抗V5-Tag单克隆抗体,小鼠抗V5标签单克隆抗体。推荐稀释比例:WB(1:20000~100000),IP(1:2000~20000),ELISA(1:50000~100000)。
V5-Tag是一种合成的14aa多肽(GKPIPNPLLGLDST),载体构建中常作为一种标签用于蛋白的表达及后续检测。本品可用于特异性检测V5-tag融合蛋白。
产品类型:Mouse monoclonal antibody (Mouse mAb) IgG1
反应性:Human
应用:WB、IP、ELISA
V5-tag分子量:1kDa
储存缓冲液:PBS with 0.1% sodiu*(代"m") azide and 50% glycerol pH 7.3.
免疫原:peptide
纯化方式:Protein G purification
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
更多有关小鼠抗V5-Tag单克隆抗体打折促销的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
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NF-214 羊抗人C9血清
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9002-18-0 琼脂粉 Agar,Powder
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小鼠抗V5-Tag单克隆抗体打折促销关键词:小鼠抗V5-Tag单克隆抗体,V5-Tag抗体,SY0655
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"
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DNaseⅠ(RNase free) 10KU
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小鼠抗V5-Tag单克隆抗体打折促销关键词:小鼠抗V5-Tag单克隆抗体,V5-Tag抗体,SY0655
·胰酶-EDTA溶液(0.25%),含酚红
编号:SY0525
英文名称:Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red
规格:100ml
本品为溶于Hanks平衡盐溶液(Hanks Balanced Salt Solution)的胰酶-EDTA溶液,其中包含2.5g/L胰蛋白酶(1:250),0.2g/L EDTA,但不含CaCl2、MgCl2 • 6H2O 和 MgSO4 • 7H2O,以1×工作液形式提供,可直接用于组织和单层细胞的解离。本品已经过猪细小病毒和支原体实验测试。含酚红。
胰蛋白酶(Trypsin)是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝*酸蛋白酶,能水解蛋白,以无活性的胰蛋白酶原(trypsinogen)的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖*酸或精*酸的羧基端(二者紧接脯*酸的情况除外)。
螯合剂:EDTA
指示剂:Phenol Red
类别:动物源性
外观:液体
pH范围:7.2-8.0
渗透压:270-320 mOsm/kg
储存条件:-20℃,避免反复冻融
·总RNA提取试剂(同Trizol)
编号:SY0269
英文名称:Total RNA Extraction Reagent
规格:100ml
本产品是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞总RNA抽提的试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解,在加入*仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层 (鲜红色下层),RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA, 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。
此外,在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
本品操作简单快速,所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。
注意事项
1)需自备*仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇 (DEPC水配制)、DEPC和DEPC水。
2)戴一次性干净手套;在单独的洁净的区域操作;在操作过程中避免讲话,以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。
3)请尽量使用RNase free的实验器具,包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.1% 的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用,不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。
4)本产品中含有*酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;
5)样品用Total RNA Extraction Reagent 匀浆后,如果不即刻加入*仿进行下游实验,可先于-70℃下冻存,可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀,可于4℃保存1周,-20℃保存1年。
6)RNA半衰期比较短,易降解,建议抽提后尽快进行后续实验。
储存条件:4℃,避光,有效期一年。
参考用量
表1 每1 ml Total RNA Extraction Reagent 能够充分裂解的最大样本量如下:
| 贴壁细胞 | 10 cm2培养面积 |
| 悬浮动植物细胞或酵母细胞 | 5×106-1×107个 |
| 细菌 | 107个 |
| 全血 | 50 μl |
| 动物组织 | 30-100 mg |
| 植物组织 (多糖和多酚含量不高的) | 50-100 mg |
*过多的样本量可能会导致裂解不充分,并使产物纯度降低。
操作流程
1 样品的处理
1.1 样品的匀浆
A. 贴壁细胞
尽量弃去培养液,直接往直径3.5cm的培养板中加入1ml Total RNA Extraction Reagent 覆盖并反复吹打裂解细胞。
【注】:
1)依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定所需的Total RNA Extraction Reagent 量(每10cm2 加1ml)。
2)当加入Total RNA Extraction Reagent量不足时可导致抽提的RNA有DNA污染。
3)贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全裂开,并已释放RNA,继续后续实验即可。
B. 悬浮细胞
离心收集细胞,每5×106~1×107个细胞加入1 ml Total RNA Extraction Reagent,用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
【注】:在加入Total RNA Extraction Reagent前避免洗涤细胞,否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C. 动/植物组织
取新鲜动植物组织或-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨,按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent 混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎,加入适当Total RNA Extraction Reagent量,匀浆仪进行匀浆处理。
【注】:样品体积一般不要超过Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
1.2 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
1.3(可选)在4℃条件下,12000rpm 离心10min,取上清。
【注】:如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂应尽量去除,取澄清的匀浆液进行后续实验。
2 总RNA提取
2.1 向上述裂解液中加入1/5体积的*仿。盖紧离心管盖,剧烈震荡15秒,室温静置2-3min。
2.2 12,000 rpm 4℃ 离心10-15分钟。
【注】:
1)离心后混合物可分3层:上层无色水样层,中间层,下层红色有机*酚*仿层。RNA无一例外的存在于水样层中。
2)该部分容量大约为所加Total RNA Extraction Reagent 总量的50-60%。如用1 ml Total RNA Extraction Reagent提取,上层水相约为500-600 μl。建议吸取400-500 μl,不要吸的太完全,以防吸到中间层导致基因组污染。
3)有机相和中间层是蛋白和DNA,如有需要,请予以保留,并进行相关纯化实验。
2.3 小心吸取上层水相至一个新的离心管中,加入等体积的异丙醇。颠倒混匀后室温放置10min。(RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。)
2.4 12,000rpm 室温或4℃ 离心10分钟。
2.5 小心弃去上清,加入1 ml用DEPC水配制的75%乙醇。充分洗涤管盖和管壁,并轻弹管底,让沉淀悬浮起来。每使用1ml Total RNA Extraction Reagent 用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
2.6 12,000 rpm 室温或4℃ 离心3分钟,弃去上清,注意不要丢失RNA沉淀。
【注】:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
2.7 室温放置2-3min,晾干。加入30-100ul RNase free water(DEPC水),待完全溶解后,取少量检测,其余在-70℃保存。
3 产物检测
A. 完整性检测
1)取1 μl RNA加入适当 10×DNA loading buffer,混匀。
2)进行1% 琼脂糖凝胶电泳。若能看见清晰的三条带,证明RNA完整性较好。
【注】:如果是普通的琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
B. 纯度检测
检测260 nm,280 nm OD值,并计算OD 260/OD 280。纯的RNA的比值应在1.8-2.2之间。
应用举例
分别利用本品Trieasy和Trozol从胶质细胞中提取Total RNA,利用1%琼脂糖凝胶电泳检测,所提取RNA具有较好完整性, OD值均>1.9。
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细胞悬液,置于50ml离心管中,避免将纤维性杂质移入离心管。200g离心5min以洗涤细胞。采用“去除脾脏细胞悬液中的红细胞”的方法裂解红细胞,或使用Tris/NH4Cl裂解缓冲液。每个脾脏的细胞用1ml HBSS/3%(V/V)FBS混悬。 3. 用台盼蓝拒染法计数活细胞。用HBSS/3% FBS混悬细胞至5×107 个细胞/ml。置于冰上保存。 4. 制备下述单克隆抗体的10×混合溶液(10×每种抗体的饱和浓度): GK1.5(抗CD4) 35-6.72(抗CD8) M5
抗原免疫后制备的文库或文库经过多次混杂重组,则可以得到更高的亲和力的催化性抗体。抗独特型抗体也用于催化性抗体的制备,用酶作为抗原免疫小鼠获得能够封闭酶活性位点的单克隆抗体,将这个抗体用蛋白酶除去Fc片段,用Fab免疫其他品系的小鼠或家兔,得到的抗体具有相应的酶催化活性医学教|育网搜集整理。 从理论上看,B细胞具有全套免疫球蛋白的多样性的胚系基因,当然也包括有催化作用的自身抗体在内。然而1989年PaulW.首次报道了人体的一种能催化蛋白质水解的免疫球蛋白。它是—种自身抗体,能水解血管活性肠肽
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