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HotStart Pfu DNA Polymerase
长期
北京百奥莱博科技有限公司
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括热启动高保真酶北京厂家在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:热启动高保真酶北京厂家
英文名:HotStart Pfu DNA Polymerase
规格:100U
编号:SY0038
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体,可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR,扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的,新一代超保真DNA聚合酶,具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性,可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升,即使是非常复杂的模板,也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52,是Pfu酶的1/6;且扩增速度可以达到15秒/kb。
本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM),可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外,产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组份:
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4):1.25 ml
25 mM MgSO4:1 ml
dNTP Mix(10 mM each):100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl):100 μl
5×PCR Enhancer:500 μl
DMSO:100 μl
10×Loading buffer:1.25 ml
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃ 30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
储存条件:-20℃
质量控制:
核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,加入2U本品,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测1:50 μl PCR体系中加入1U本品,以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2:50 μl PCR体系中加入1U本品,以10 ng λDNA为模板扩增30个循环,取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的15 kb条带。
使用方法:
1. 所有操作请在冰上进行,各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物,请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。
ddH2O | to 50 μl |
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4) | 10 μl |
d25 mM MgSO4a | optional |
ddNTP Mix(10 mM each)b | 1 μl |
dDMSOc | optional |
d5×PCR Enhancerd | optional |
d模板DNAe | optional |
dForward Primer(10 μM) | 2μl |
dReverse Primer(10 μM) | 2 μl |
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f | 1 μl |
模板种类/扩增长度 | <1 kb | 1 kb~10 kb | >10 kb |
基因组DNA | 50 ng~250 ng | 100 ng~300 ng | 150 ng~400 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg~20 ng | 10 pg~20 ng | 1 ng~30 ng |
cDNA | 1~5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10) |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性a | 95℃ | 30 sec~3 min | 1 |
变性b | 95℃ | 5~10 sec | 25~35循环 |
退火c | 45℃~72℃ | 10~30 sec | |
延伸d | 72℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 72℃ | 5~10 min | 1 |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 92℃ | 2 min | 1 |
变性 | 92℃ | 5~10 sec | 25~35循环 |
延伸 | 68℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 68℃ | 5~10 min | 1 |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 25~35循环 |
退火 | 45℃~72℃ | 10~30sec | |
延伸 | 72℃ | 15~30 sec/kb | |
彻底延伸 | 72℃ | 5~10 min | 1 |
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