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- 英文名:
RIPA lysis buffer (Weak)
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货RIPA裂解液(弱)打折促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货RIPA裂解液(弱)打折促销
品牌:百奥莱博
编号:SY0315
英文名:RIPA lysis buffer (Weak)
规格:100ml
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。
本品为较为温和的裂解液(即RIPA裂解液(弱)),含有sodiu*(代"m") orthovanadate,sodiu*(代"m") fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
注意事项
1)需自备PMSF。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
使用说明:
(一) 细胞样品
1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
北京现货RIPA裂解液(弱)打折促销正在火爆热销,除此之外,为您推荐下别热销产品:
·HRP标记小鼠抗GFP-tag单克隆抗体
编号:SY0662
英文名称:HRP-conjugated GFP-tag, Mouse mAb
规格:10μl(>50次)
本品为HRP标记小鼠抗GFP-tag单克隆抗体,HRP标记小鼠抗GFP标签单克隆抗体。推荐稀释比例:WB(1:5000~50000)。
GFP(Green Fluorescent Protein)最早是从一种生活在北太平洋寒冷水域的水母(Aequoria victoria) 体内发现的蛋白,该蛋白在蓝色波长范围的光激发下能发出绿色的荧光,其最大和次大的激发波长是395 nm和470 nm;最大发射波长是509 nm,在540 nm处有一肩峰。
由于GFP具有荧光性质稳定,对细胞无毒害,表达具有光谱性等一系列的优点,常作为报告基因,融合标签和细胞标记物等,应用于分子和细胞生物学领域。
反应性:重组蛋白
宿主:Mouse
应用:ELISA, WB
抗原分子量:26kDa
储存缓冲液:含0.02%硫汞撒、50%甘油的PBS,pH7.3
纯化方式:Protein A纯化
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
北京现货RIPA裂解液(弱)打折促销关键词:RIPA裂解液(弱),SY0315,RIPA lysis buffer (Weak)
E0605 脱纤维裂解马血(无菌) 100ml/500ml
ARB12241 大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)血清中含量检测 Rat vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,vegfr-2/flk-1 ELISA KIT
强Tris盐缓冲液(pH7.5) 100ml
BTN90509 包涵体中量纯化试剂盒 Inclusion Body Midiprep Kit
茜素络合指示剂 Erioglaucine disodiu*(代"m") salt 3952-78-1
DP420 微量样本RNA提取试剂盒
M0102 酶(HRP)标记物保存稀释液
ARB13740 兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)Elisa定量检测 Rabbit granulocyte colony stimulating factor,g-csf ELISA KIT
滂胺天蓝 (S)-(+)-1,2-Propanediol 2610-05-1
BTN131141 dNTP和引物清除剂 dNTP-Primer Erasol
疏水硅烷 Xylene blue
PL2001 BAC/PAC大型质粒提取试剂盒(溶液型,转染级)
BFD025 呋*(代"喃")唑酮快速检测试剂盒
枸橼酸*抗凝剂(4%,无菌) 100ml
ARB13754 骆驼β内啡肽(β-EP)检测服务 Camel beta-endorphin,β-ep ELISA KIT
甲*-4-磺酸 L-Tyrosine methyl ester hydrochloride 6192-52-5
ARB10757 人抑癌基因BeclIn1(BECN1)酶标法分析 Human beclin1,becn1ELISA KIT
BTN120512 即用型蓝白T载体B型(T7-T3,有MCS) Instant Blue-White Vector T,Type B
F020109 山羊抗乙肝e抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBeAg
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·MBP标签蛋白纯化预装柱,1ML
编号:SY0402
英文名称:Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML
规格:1ml|5ml
本品是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin6FF的一种中压预装柱,规格1ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。
Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用
10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
此外,Dextrin Agarose Resin6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖微球
配体(Ligand):糊精
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>10mg MBP蛋白(80kDa)
最大压力(PressureMax):0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围:3-12
储存缓冲液:20%乙醇
储存条件:4℃,有效期2年
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购北京现货RIPA裂解液(弱)打折促销。
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文献和实验,比如 RIPA,虽然裂解剧烈,但是无法维持蛋白天然构象,会破坏互作蛋白对。 如果自配,建议采用温和系统,比如 NP40/Triton 0.1%-1%;SDS ≤0.1%,盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合,要考虑孵育(结合)顺序 如果抗体和 beads 先孵育,建议 选择 pH 8.2(更常用)或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y,抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X
【原创】Western Blot技术交流第一期 蛋白样品的获得
样本的获得。 Western Blot实验主要目的是检测蛋白质的表达,所以首先得从实验样本中获取蛋白质,目前使用较多的样本是细胞及哺乳动物组织、其次是细菌及真菌、再后是植物。 细胞及哺乳动物的组织:目前提取与纯化蛋白质最经典的方法是RIPA强、中、弱系列的裂解液及NP-40裂解液、SDS裂解液、哺乳动物蛋白抽提试剂,组织蛋白抽提试剂。这几种裂解液裂解原理相似,但作用效果不同,实验者需要根据自身实验需求来选取合适的裂解方式,例如RIPA(强)裂解液与SDS裂解液是作用效果很强的裂解液,可以使样本充分
?如果我想检测全细胞的蛋白,不分可溶性和不溶性,应该怎么做呢? waterzouyx RIPA裂解液也分强、中、弱的,要看看你的目的蛋白是否为难溶性蛋白,如果为难溶,你的沉淀中有目的蛋白也正常了。暂时没听说不溶性蛋白可以做WB的。个人认为你要求的全细胞蛋白的问题,你可以考虑用二维电泳用的蛋白裂解液,其裂解效率非常高,不溶性沉淀非常少 。另提醒下,RIPA法裂解的蛋白提取物,不能用Bradford法测定蛋白浓度的 zhangyong1980121
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