- ¥890
- 上海雅吉生物科技有限公司
- 100825-200
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海雅吉生物科技有限公司
- 英文名：
Auto-induction Medium
- 规格：
200 mL
饱和生长期后的自动诱发。本产品具有下列特点：
1. 本产品自动诱导表达，不需要添加任何 IPTG 或相关诱导物，节约成本。
2. 免去了密切监控菌液密度的过程，尤其适合大规模筛选。
3. 极大将细菌的生长密度 OD600 从 2 左右提高 20 以上。
4. 极大提高外源蛋白的表达量，最高可占细菌总蛋白的 45%。
5. 与各种细胞培养容器（如培养瓶、培养罐、深孔管、发酵罐等）兼容。
6. 本产品即开即用，非常方便。
7. 适用于 T7 RNA 聚合酶基因由 lac 启动子控制的任何表达系统，如 pET系列。
8. 不适用于 lacZ 或 lacY 突变的宿主菌
自诱导培养基（lac启动子）规格及成分 ： 200mL 立盒包装 成份 A 100825A 200 mL 成份 B 100825B 1.25 mL 使用手册 100825sc 1 份
运输及保存 常温运输及保存，有效期两年。
自备试剂 蒸馏水
使用方法 一：培养基的配制
1. 配制自诱导培养基：将 1.25 mL 溶液 B 全部加入到 200 mL 的溶液 A中即得自诱导培养基。注意：必须严格无菌操作，否则自诱导培养基非常容易长细菌。
2. 贴好标签待用。如果长期时间不用，可以冻存在-20℃。
二：培养基的使用
1. 将构建好的质粒转化入细菌，如 BL21（DE3），涂于自备的、含有 1%葡萄糖的 LB 培养基中（需要加入适当浓度的抗菌素），37℃培养过夜。
2. 挑取单个细菌接种到自备的、含适当浓度抗菌素的液体 LB 培养基中，
37℃培养直到菌液浑浊但不饱和（一般需要 6-8 小时）。
3. 将所得菌液按千分之一的体积比例加入自诱导培养基中（如果自诱导培养基体积是 100 mL，则加入 100 uL 菌液），同时加入适当的抗菌素。注意：在自诱导培养基中，如果使用卡拉霉素，其终浓度比一般的培养基高，需要 100 ug/mL。由于本方法所得菌液密度大，故需要大量氧气，因此培养基的体积不能超过三角瓶的五分之一。三角瓶底最好是皱褶式的，这样摇晃中氧气供应更充分。
4. 37℃培养过夜，或37℃培养到菌液饱和时降低摇床的温度到所需温度（对温度诱导型启动子）。
5. 收集菌液开始蛋白纯化步骤。
自诱导培养基（lac启动子）关联产品 自诱导培养基（阿拉伯糖启动子专用，CAT120516）、零诱导培养基
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文献和实验E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
这个乳糖操纵子系列受阻遏蛋白调控，乳糖水平很低的时候，阻遏蛋白结合到启动子上，操纵子关闭。相反，如果乳糖存在，阻遏蛋白被抑制，转录就被诱导。此时 β-半乳糖苷酶就能正常催化乳糖。 乳糖结构式 半乳糖结构式 IPTG 似乎到这里，也没发现这对我们克隆、表达有啥用？别急，接着往下看。 Lac 操纵子的组成 Lac 操纵子的组成具体如下。我们看到有一个启动子、转录调控位点（图中 c）、CAP 结合位点（图中
酶的调控方式仍可能有痕量的本底表达，控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制本底表达水平。 二是采用带有T7 lac启动子的载体 ——这些质粒在紧邻T7启动子的下游有一个lac操纵子序列。它们同样带有常规启动子以及编码lacI阻遏蛋白的序列，T7lac和 lacI启动子位置交错。采用这种载体及DE3溶原菌，lac阻遏蛋白既可以作用于宿主染色体lacUV5 启动子，抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶，也可以作用于载体T7lac 启动子，从而阻断任何 T7 RNA聚合酶导致
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