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Hygromycin B
31282-04-9
长期
北京百奥莱博科技有限公司
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特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
潮霉素B试剂 抗生素类的品牌:百奥莱博,是优质的抗生素类产品,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多潮霉素B试剂等抗生素类产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:潮霉素B试剂 抗生素类
英文名:Hygromycin B
编号:QN0023
规格:1g
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本品常用做蛋白质合成抑制剂,可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉,用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水,PBS溶液。
CAS:31282-04-9
储存条件:-20℃
别名:湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价:≥950U/mg
潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种*基糖苷类抗生素,通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),编码潮霉素B磷酸转移酶,将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418,Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
使用方法
1. 常用筛选浓度
注意:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1)第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度(μg/mL) | 培养基体积(ml) | 5mg/ml潮霉素B加入体积(ml) |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
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