BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书
产地：国产|进口
编号：WE0254
英文名：BL21(DE3)pLysS Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。该菌株携带pLysS质粒，具有*霉素抗性，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

 

组份	0.1ml×10支
BL21(DE3)pLysS Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

除BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书外，我公司正在打折促销以下产品：

·新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0202
英文名称：RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
  本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA，即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA，如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣，香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方，可使细胞中的RNA酶迅速灭活，有效去除多糖多酚对RNA提取的影响，无需*酚、*仿等试剂，同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化，提取的总RNA纯度高，无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RLS	40ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FS及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

产品特点：
1、适用范围广：可从各种植物中提取总RNA，即便是多糖多酚含量丰富的植物也能成功提取。
2、纯度高：彻底去除污染物及下游反应抑制物，提取的RNA适合于多种下游应用。
3、成功提取的样本：水稻叶片、小麦叶片、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黄豆、花生、马铃薯块茎、松针、银杏叶、杨树叶、冬青叶、月季等样本。

RNA得率：

植物样本(100mg)	总RNA量(μg)
拟南芥荚果	～50
大豆	～55
玉米叶片	～55

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头。
② 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、Buffer RLS如果产生沉淀，请加热使其溶解后室温放置。
4、Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RLS加20μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
5、第一次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。

操作步骤：
1、匀浆处理：取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末，加入500μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇)，立即涡旋剧烈震荡混匀。
注意：对于含水量极其丰富的材料，如西瓜果肉，西红柿，梨果肉等，可以适当多加入些材料，最多可增加至200mg；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，可适当增加Buffer RLS的用量，最多可增加至700μl。
2、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟。
3、将上清液转入已装入收集管的过滤柱中，4℃ 12000rpm离心1分钟，小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中，枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4、缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入。4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1，4℃ 12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4℃ 12000rpm离心1 分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、4℃ 12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free Water，室温放置2分钟，4℃ 12000rpm离心1分钟，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
① RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：2～8℃。


BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书关键词：DE3,BL21(DE3)pLysS感受态细胞,BL21(DE3)pLysS Competent Cell,WE0254

羟基磷灰石 Aluminum ammonium sulfate 1306-06-5
596-09-8 二乙酸荧光素 Fluorescein diacetate
BTN131212 PCR Mix染料 PCR Mix Dye
NF-218 抗C反应蛋白(CRP)血清
F020231 兔抗绵羊/山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG
BL0964 正常人血清 5ml
ARB11884 人磷状癌细胞抗体尿液中含量检测 Human squamous cell carcinoma antibody  ELISA KIT
内源性生物素清除液(1×)   10ml
ARB13846 猪弓形虫抗原(Tox-Ab)Elisa定量检测 
ARB10530 人鸟苷酸结合蛋白4(Gbp4)酶联免疫定量检测 Human guanylate nucleotide binding protein 4,gbp4 ELISA KIT
F030827 BIOTIN标记兔抗鸭IgY IgG抗体 Rabbit Anti-Duck IgY*BIOTIN
ARB12211 大鼠成纤维细胞生长因子10(FGF-10)Elisa分析 Rat fibroblast growth factor-10,fgf-10 ELISA KIT
C1001 猪血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
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·SuperSYBR Mixture(不含ROX校正染料)
编号：WE0136
英文名称：SuperSYBR Mixture
规格：1ml|5ml
  本品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料和Mg2+，操作简单。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。
  本品所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。该产品适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪，如：Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96。

试剂盒组成：

组份	1ml	5ml
2×SuperSYBR Mixture	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

产品特点
1、本产品中使用了全新高效热启动酶BaldStar Taq DNA Polymerase与独特的PCR缓冲体系，显著提高PCR的扩增效率，具有高灵敏度和特异性强的特点。
2、适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有SYBR Green I荧光染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。
5、配制反应液时，请使用新的或者无污染的枪头和离心管，尽量防止污染。

操作步骤：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×SuperSYBR Mixture	2 5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)推荐反应体系为50μl，也可以根据实际实验需求按比例扩大或者缩小反应体系。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

建议采用下表显示的两步法PCR进行程序设定，本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例。若因Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR 扩增，三步法操作步骤详见《反应条件的优化》。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
3)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

反应条件的优化：
在荧光定量反应条件优化时，应从引物浓度、退火温度、延伸时间等方面进行考虑，以提高反应特异性和扩增效率。
1、反应特异性和扩增效率高的实验体系应具备以下条件：
1)反应特异性高：阴性对照无引物二聚体等非特异性扩增；不产生目的片段以外扩增。
2)扩增效率高：Ct值低；PCR扩增效率高，接近理论值100%。
2、反应条件优化方法：
1)引物浓度：通常引物浓度以0.2μM可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。若提高反应特异性，可降低引物浓度；若提高扩增效率，可增加引物的浓度，由此优化反应体系。
2)退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)延伸时间：建议采用两步法PCR，延伸时间1 min进行反应。若提高扩增效率，可尝试将延伸时间增加，或尝试三步法PCR。
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

三步法荧光定量PCR(本程序是以ABI7500荧光定量PCR仪为例)：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	10 s	35-40个循环
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s
融解曲线分析	95℃	15s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度。
3)若需提高反应扩增效率，可适当增加延伸时间。
4)本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

我公司正在优惠促销克隆与表达等系列产品，期待您的咨询选购BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明书。