酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Yeast Proein Extraction Kit
规格：25次|100次
编号：WE0263
  本试剂盒用于从酵母细胞中快速，高效而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理，可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比，处理得到的提取液中可溶蛋白产量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于Ni-NTA、GST等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Yeast Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、提取液中含有去污剂，不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。
2、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Yeast Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将酵母培养液3000×g，4℃，离心5分钟，收集菌体。
3、取适量Yeast Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每50 mg酵母加入500μl 1×工作液，涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。
5、将细胞悬液置于冰上，孵育20分钟(每间隔5分钟轻微摇晃一下)。
6、～13400×g离心10分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。

储存条件：-20℃

我公司的酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·Protein G琼脂糖凝胶
编号：WE0270
英文名称：Protein G-Sepharose
规格：5ml
  本产品为Protein G与Sepharose偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。Protein G是链球菌(group C和G)细胞表面蛋白。它不Protein A类似，通过不免疫球蛋白的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。但两者结合特异性有所丌同。Protein G对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a等具有高亲和力。天然Protein G具有白蛋白和细胞表面结合域。重组Protein G去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。本产品具有广谱 IgG结合、高Fc段结合活性、高抗体吸附量和性能稳定等特点，可重复多次使用。

注意事项：
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性，以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理，长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液：20 mM PBS，150 mM NaCl，pH7.4-8.5。
2、洗脱缓冲液：0.1 M Glycine，pH2.5-3.0。
3、再生缓冲液：1 M NaCl。
4、中和缓冲液：1 M Tris-Cl，pH9.0。
注意：
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。

II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰，去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意：样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。

III 操作步骤
1、将Protein G-Sepharose填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净，用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱，上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积，直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。
注意：操作中如果没有实时的蛋白监测系统，收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中，最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积，再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积，再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2～8℃保存。

储存条件：2～8℃，避免冷冻


酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究关键词：WE0263,Yeast Proein Extraction Kit,酵母蛋白抽提试剂盒


·2×BaldStar Taq MasterMix(含染料)
编号：WE0112
英文名称：2×BaldStar Taq MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  本品是由BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，预混好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增，特有的MasterMix配方使整个反应体系稳定性更强。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。用本品进行PCR扩增，PCR产物3"末端含有A，可直接用于T/A克隆。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。主要应用于常规的PCR、RT-PCR和多重PCR，特别适用于对特异性要求较高的PCR反应。

产品组成：

组份	5ml
2×BaldStar MasterMix(With Dye)	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意：2×BaldStar MasterMix含有BaldStar DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检测无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残留DNA；
3、能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为30-60 s，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaldStar Taq DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究关键词：WE0263,Yeast Proein Extraction Kit,酵母蛋白抽提试剂盒


·Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×)
编号：WE0311
英文名称：Tris-Glycine Transfer Buffer(pH8.3, 10×)
规格：500ml

·RNase A溶液(100mg/ml)
编号：WE0225
英文名称：RNase A(100mg/ml)
规格：1ml

·蛋白酶K
编号：WE0212
英文名称：Proteinase K
规格：100mg
  蛋白酶K是一种以丝*酸为活性中心的枯草类蛋白酶，具有广泛的底物特异性，特别优先分解与疏水性*基酸、含硫*基酸、芳香族*基酸C末端邻接的酯键和肽键。可在多种不同盐、变性剂、去污剂、pH值和温度条件下进行分解蛋白作用。在提取DNA和RNA的缓冲液中具有很高的活性，主要用于DNA、RNA制备过程中蛋白的消化。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml的蛋白酶K 储存液使其溶解,溶解后的蛋白酶K 浓度为20mg/ml。
2、孵育温度为25℃～65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。
3、配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。-20℃长期保存。

储存条件：室温(15～30℃)

北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购酵母蛋白抽提试剂盒 蛋白质研究。