WE0180型粪便基因组DNA提取试剂盒哪里卖

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0180型粪便基因组DNA提取试剂盒哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：WE0180型粪便基因组DNA提取试剂盒哪里卖
品牌：百奥莱博
规格：50次
编号：WE0180
产地：国产|进口
  本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA，包括细胞、细菌、寄生虫以及病毒DNA，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg的粪便样本，纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段，纯化过程中不需*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer SW	60ml
Buffer SL	60ml
Buffer GL	50ml
Buffer GW1(浓缩液)	2×13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
吸附柱DM及收集管	50套

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号:WE0225S。

操作步骤：
1、取100-300 mg粪便样本，置于离心管(自备)中。
2、加入1ml Buffer SW，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中。12000rpm(～13400×g)离心1分钟，弃上清。
3、加入1ml Buffer SL，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中，65℃水浴20分钟，期间可每隔5分钟涡旋振荡15秒。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm离心3分钟，将上清移至新的离心管(自备)中。
5、向上清液中加等体积Buffer GL，颠倒混匀15-25次，冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意: 此时液体可能为透明或浑浊状态，均不影响实验。
6、将步骤5中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
11、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。

储存条件：室温(15～30℃)。

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·2×富含GC PCR MasterMix
编号：WE0116
英文名称：2×GC-rich PCR MasterMix
规格：1ml
  本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥最大功效，实现对复杂模板的高保真、高效率扩增，独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20kb，对复杂模板可达10kb。

产品组成：

组份	1ml
2×GC-Rich PCR MasterMix	1ml
ddH2O	1ml

注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×GC-Rich PCR MasterMix	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·无RNA酶水
编号：WE0217
英文名称：RNase-Free Water
规格：100ml
本品为不含RNase的水，常用于RNA的提取纯化、RT-PCR等分子生物学实验。

·细菌蛋白抽提试剂盒
编号：WE0261
英文名称：Bacterial Protein Extraction Kit
规格：100次
  本试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

试剂盒组成：

组份	100次
Bacterial Protein Extraction Reagent	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	1ml
Lysozyme(50 mg/ml)	200μl
DNaseⅠ(1000U/ml)	100μl

保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
2、本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
3、使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
4、对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
5、根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。

使用方法：

细菌可溶性蛋白提取
1、5000×g离心10分钟，收集菌体。
2、可选步骤：每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1μl DNase I(1000U/ml)、2μl Lysozyme(50 mg/ml)和10μl Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
3、按照每克菌体沉淀加入20ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
4、重悬后，室温孵育10-15分钟(放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
5、15000×g离心5分钟。
6、转移上清至新的离心管中(上清中即为可溶性蛋白)，进行蛋白定量及下游实验。
注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。

昆虫细胞蛋白提取
1、低速离心收集细胞。每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
2、称量细胞湿重，按10ml/g的量加入1×工作液。
3、重悬后，冰上孵育20分钟(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、15000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。

常见问题分析
 

问题	可能原因	解决方法
目的蛋白不溶	目的蛋白表达为包涵体	优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液
		在蛋白抽提试剂中加入Lysozyme 和DNase I
加入Lysozyme 后目的 蛋白仍没有提取出来	温度过低	将使用试剂恢复至室温
	Lysozyme 活性降低或失活	加入更多的Lysozyme 或更换新的酶
提取物粘度高	DNase I 活性降低或失活	加入更多的DNase I 或更换新的DNase I
		将*离子的终浓度增加至2 mM
蛋白抽提后仍有大 部分蛋白存在于沉淀中	蛋白量过大	加入Lysozyme及DNase I
蛋白抽提试剂有沉底析出	温度过低	将蛋白抽提试剂恢复至室温

储存条件：-20℃


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·DNA快速连接试剂盒
编号：WE0248
英文名称：Quick DNA Ligation Kit
规格：20次|100次
  快速连接试剂盒在室温(25℃)反应5分钟可完成DNA粘性末端或平齐末端的连接反应。试剂盒含有Quick T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。快速连接的连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。快速连接产物可直接用于常规的细菌转化实验。

试剂盒组成：

组份	20次	100次
Quick T4 DNA Ligase(15 U/μl)	20μl	100μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	200μl	5×200μl

注意事项：
1、本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2、2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4、如快速连接产物用于电转，快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	20μl体系
Vector DNA	Xμl(10-100ng)
Insert DNA	Yμl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	10μl
Quick T4 DNA Ligase(15 U/μl)	1μl
RNase-Free Water	补足至20μl

注：Insert DNA的使用量：Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为1:3-1:8，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。DNA摩尔数计算方式： DNA摩尔数(nmol)=DNA质量(ng)/(660 daltons×插入DNA碱基数bp)。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、勿进行加热失活反应。瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
注意：因缓冲液中含有PEG，加热失活会显著降低转化效率。
4、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、将连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
1)用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
2)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

储存条件：-20℃。

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