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北京百奥莱博科技有限公司
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特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒大量库存促销在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒大量库存促销
规格:48次/盒
产地:国产|进口
等级:科研试剂
品牌:百奥莱博
一、简介
本试剂盒用一对手足口通用型特异性引物,一对手足口EV71型特异性引物,一对手足口CA16型特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光RT-PCR技术对手足口通用型EV-U RNA、手足口EV71型RNA、手足口CA16型RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中手足口通用型的探针报告基团为CY5,手足口EV71型的探针报告基团为FAM,手足口CA16型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。
二、用途:
本试剂盒适用于检测各种脑脊液、咽拭子、粪便或肛拭子或疱疹液内的液体等。可用于手足口病病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
EV-U+EV71+CA16荧光反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX) 2管 456μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 30μL/管
阳性对照(EV-U+EV71 +CA16-PTC) 1管 30μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为9个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
1ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、病毒RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-80℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品:在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水,剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中,6000rpm离心20s,取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品:称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理盐水研磨至无块状物,然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
6.2.2 加入600 µL 裂解液,200 µL样本,200 µL *仿,混匀器上振荡5 s,4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层),加入400 µL 异丙醇,颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min,弃上清;加入600 µL 75%乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min,弃上清。打开离心管管盖,室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10µL 无核酸酶水,溶解管底的RNA,5000 rpm离心5 s,-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19µL N×19µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20µL N×20µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 3 min
PCR扩增 45循环 95℃ for 5 sec
55℃ for 60 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。设置为CY5、FAM和HEX/VIC/JOE。其中CY5基团检测EV-U,FAM基团检测EV71,HEX/VIC/JOE基团检测CA16。
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
(2) 阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC):EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) CY5通道:Ct值≤35手足口通用型病毒核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明手足口通用型病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明手足口通用型病毒核酸阳性;否则判为样本阴性
(2) FAM通道:Ct值≤35 EV71型手足口病病毒核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明EV71型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明EV71型手足口病病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
(3) HEX/VIC/JOE通道:Ct值≤35 CA16型手足口病病毒核酸为阳性;Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明CA16型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明CA16型手足口病病毒核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
我公司的手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒大量库存促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·诺如病毒G1型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA201
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·蜡样芽孢杆菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA011
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Bacillus cereus
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对蜡样芽胞杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对蜡样芽胞杆菌的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
本试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的蜡样芽胞杆菌(BC),用于蜡样芽胞杆菌(BC)感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
BC反应液(BC-qPCR MIX) 1管 672μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
BC阳性对照(BC-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
水样便取0.5-1mL;疑似污染的食物取1g。
6.2 样品前处理
水样便13000 rpm离心 2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100µL于1.5mL灭菌离心管中;疑似污染的水直接取100µL。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(BC-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(2) 在试验成立的条件下,Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线,表明BC核酸阳性。
(3) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明BC核酸阴性。
(4) 如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(5) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行BC 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明BC核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒大量库存促销关键词:百奥莱博,手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒,SYA214
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手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒大量库存促销关键词:百奥莱博,手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒,SYA214
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