猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒品牌，是高品质的病毒PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒品牌
规格：48次/盒
编号：SYA778
产地：国产|进口
等级：科研试剂
品牌：百奥莱博
一、简介
本试剂盒用一对猪细小病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对猪细小病毒核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、原理
该试剂盒适用于检测带毒猪血液、分泌物、排泄物以及肾、肺、肝、脑、睾丸、淋巴结和胎盘等组织标本中猪细小病毒(PPV)DNA，用于猪细小病毒(PPV)感染的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
荧光PCR反应液 1管 672μL/管
阴性对照 1管 50μL/管
阳性对照 1管 50μL/管
FD1试剂 1瓶 15mL/瓶
FD2试剂 1管 500μL/管
FD3试剂 1瓶 15mL/瓶
FD4试剂 1瓶 30mL/瓶
FD5试剂 2管 2mL/管
吸附柱及收集管 1包 48套/包

四、储存条件及有效期
荧光定量PCR试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月；DNA提取试剂盒于常温保存，有效期为12个月。1.5mL离心管、移液器、吸头等请自备。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 DNA提取
6.2.1 在上述样本中加入300μL FD1试剂和10μL FD2试剂，震荡混匀；
6.2.2 58℃孵育至完全裂解(样品不同而异，细菌、液体样本建议孵育15min，动物细胞、组织和粪便样本建议孵育15min-1h，样本裂解越完全，核酸提取效果越好)；
6.2.3 12000 rpm离心5min，转移上清于一无菌离心管中；
6.2.4 在2.3的离心管中加入300ul FD3试剂，震荡混匀；
6.2.5 将全部溶液加入带膜吸附柱(收集管)中，12000 rpm离心1min，弃去流出液；
6.2.6 加入600ul的FD4试剂，12000 rpm离心1min，弃去流出液；
6.2.7 12000 rpm离心2min，去除残留液体；
6.2.8 将吸附柱放置于新的无核酸酶的1.5 mL离心管中，在膜中央加入20-50µL FD5试剂，室温静置1min，12000rpm离心1min，收集核酸溶液，-20℃保存，若长期保存需放置-80℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(PPV-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性质控品(NTC)/阳性质控品(PPV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(PPV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明猪细小病毒核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明猪细小病毒核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行猪细小病毒qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明猪细小病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·东部/西部/委内瑞拉马脑炎病毒三重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA251
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

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编号：SYA273
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·轮状病毒A型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA197
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·单纯疱疹/巨细胞病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA145
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪流感病毒N1亚型(SIV-N1)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA453
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·人副流感病毒3型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA176
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副猪嗜血杆菌(HPS)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA570
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对副猪嗜血杆菌特异性引物，对副猪嗜血杆菌DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适合于发病猪呼吸道、血液样本中副猪嗜血杆菌(HPS)的特异性检测，用于副猪嗜血杆菌(HPS)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)

 



   

组份	数量	规格
副猪嗜血杆菌PCR反应液(HPS-PCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
阳性对照(HPS-PTC)	1管	50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离

心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂

与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.4 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-凝胶配套)，并按照相应

试剂盒说明进行操作。
6.2.1 培养物：取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR

反应。
6.2.2 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，

100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进

行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出PCR反应液(HPS-PCR MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
PCR反应液	15µL	N ×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HPS-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 PCR反应条件
将各反应管放入PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

预变性	1循环	94℃ for 2 min
PCR扩增	35循环	94℃ for 30 sec 58℃ for 30 sec 72℃ for 30 sec

八、结果分析：
（1）称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中，加入100mL 1×TAE电泳缓冲液，微波炉加热溶解，稍冷后加入10μL染色液混匀，倒入插有梳子的制胶板中。
（2）待胶凝固后，取10μL Maker(推荐使用DL2000 Maker)点样于左侧凝胶孔中，取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中，电压值设定为电泳槽正负极距离

(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。


九、结果分析：
（1）阴性对照(NTC)：无任何的条带(引物带除外)。
（2）阳性对照(HPS-PTC)：在115bp处有条带。
（3）被检样品：在115bp处有条带为阳性样品，否则为阴性样品。
（4）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。


猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒品牌关键词：SYA778,猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒,百奥莱博

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