类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒批发在内的细菌PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒批发
编号：SYA771
等级：科研试剂
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对类鼻疽伯克霍尔德菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对类鼻疽伯克霍尔德菌进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
该试剂盒适用于检测血液、痰、脑脊液、尿、浓性渗出物等样品中的类鼻疽伯克霍尔德菌(BM)，用于类鼻疽伯克霍尔德菌(BM)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
BM反应液(BM-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
BM阳性对照(BM-PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

六、样品前处理与DNA提取
6.1 样本前处理：
取抗血液、痰、脑脊液、尿、浓性渗出物。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BM-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BM-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(BM-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明类鼻疽伯克霍尔德菌核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明类鼻疽伯克霍尔德菌核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行类鼻疽伯克霍尔德菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明类鼻疽伯克霍尔德菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA087
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的肠出血性大肠杆菌溶血素基因，用于肠出血性大肠杆菌溶血素基因的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
Hly反应液(Hly-qPCR MIX)	1管	960μL/管
核酸提取液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(EnzymHly MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	250μL/管
Hly阳性对照(Hly-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集及处理：
1．水样便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
2．水样便13000rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。

二、DNA提取：
对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Hly-qPCR MIX)、酶混合液(EnzymHlyMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	20µL	N×20µL
酶混合液	1µL	N×1µL
总量	21µL	N×21µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Hly-PTC)4μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

预变性	1循环	94℃ for 2 min
PCR扩增	40循环	94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec

在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(Hly-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，且有明显的指数增长曲线，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阴性。
➤如果35＜Ct值，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明肠出血性大肠杆菌溶血素(Hly)核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒批发关键词：百奥莱博,SYA771,类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒


·空肠弯曲菌/结肠弯曲菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA100
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·玉米转基因Bt11单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA279
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·H1/H3型流感病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA167
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鸡肠炎沙门氏菌(SPP.E)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA544
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感病毒H3亚型(AIV-H3)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA384
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽流感病毒H3亚型特异性引物，结合特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽流感病毒H3亚型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽流感病毒H3亚型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于鼻咽提取物、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液等临床样品中禽流感病毒H3亚型的特异性检测。适用于禽流感病毒H3亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
禽流感H3荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(H5-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
6.2.2 加入600 μL裂解液，200 μL样本，200 μL*仿，混匀器上振荡5 s，4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层)，加入400 μL异丙醇，颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；加入600 μL 75％乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min，弃上清。打开离心管管盖，室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10μL 无核酸酶水，溶解管底的RNA，5000 rpm离心5 s，-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H3-qRT-PCRMIX)、酶混合物(EnzymesMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H3-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为HEX/VIC/JOE，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(H3-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明H3核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明H3核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行H3qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H3核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒批发关键词：百奥莱博,SYA771,类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测试剂盒


·猪圆环病毒II型抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA638
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·肠出血性大肠杆菌致贺毒素1(Stx1)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA084
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪出血性魏氏梭菌(CW)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA435
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·冠状病毒(OC43)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA181
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛支原体抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA664
英文名称：Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit
等级：科研实验专用
规格：96次/盒

【主要成分】
组份 数量 规格
包被板 1 块 96T
阴性血清对照 1 管 1ml/管
阳性血清对照 1 管 1ml/管
样品稀释液 1 瓶 50ml/瓶
10×洗液 1 瓶 30ml/瓶
兔抗牛IgG酶标抗体 1 瓶 12ml/瓶
底物显色液 1 瓶 12ml/瓶
终止液 1 瓶 6ml/瓶
说明书 1 份
【作用与用途】
适用于牛血清中牛支原体抗体的检测。
【用法与判定】
1、试剂准备
仔细阅读说明书，所有的试剂在使用前需放置于室温至少1小时，使试剂盒恢复到室温。
2、洗涤液的配制
取1 份10×洗液加入到9份双蒸水中，混匀。配好的液体，应在3天内用完。
3、稀释待检血清。用样品稀释液将待检血清做1∶160(VV)倍稀释(建议在1.5ml微量离心管中加入400μl 样品稀释液，吸取2.5μl 待检样品加入该管中充分混匀)。
4、操作步骤
4.1 加样
包被板上对照和待检样品添加如下所示。
4.2 孵育
将稀释好的样品加入包被板中，100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.3 洗涤
甩去孔内液体，用稀释好的洗涤液洗涤包被板，300μl/孔，振荡洗涤3次，拍干。

	1	2
3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
A	P	S1	S2	S3	S4
B	P
C	N
D	N
E
F
G
H

(注：“P”为阳性血清对照；“N”为阴性血清对照；S1、S2、S3、S4 为待检血清样品)
4.4 二抗孵育
向各孔中加入兔抗牛IgG 酶标抗体，100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.5 洗涤
方法同4.3。
4.6 显色
加入底物显色液，100μl/孔，置室温(15～25℃)下，避光孵育9分钟。
4.7 终止
加入终止液，50μl/孔，轻微震荡混合均匀。
4.8 读数
在加入终止液15分钟内，将包被板置于酶标仪中，用波长450nm(OD450)读数。
4.9 S/P值计算
按照以下计算公式，计算S/P值。

4.10 判定标准
4.10.1 试验结果有效的条件是：阳性血清对照OD450值均应≥0.8，阴性血清对照OD450 值均应＜0.1。
4.10.2 待检样品的S/P 值≥0.418时，判定为阳性；待检样品的S/P值＜0.418时，判定为阴性。
【注意事项】
(1)所有试剂在2～8℃条件下保存。
(2)贮存时，所有的板条一定要用封口膜密封，防止潮气对包被板的损伤。
(3)不要使底物溶液接触强光和氧化物。取出后，不得再加回瓶中。
(4)仔细阅读说明书。
(5)不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用。
(6)稀释10×洗液时，如发现存在结晶，可置37℃下加热使其溶解后再使用。
(7)注意加样和洗涤过程，以确保试验的准确度，不能用嘴吸液。
(8)被检血清发生腐败时勿用于检测。
(9)检验用器皿必须清洁，操作过程避免与金属类器物接触。
(10)在加样时，应使各孔的加样时间差别小于5 分钟，以保证各孔反应时间一致。
(11)操作过程中使用手套，终止液是硫*(代"酸")，如接触，应用清水迅速冲洗接触部位。
【贮存与有效期】
2～8℃保存，有效期为9个月。

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