小鼠多不饱和脂肪酸(PUFA)ELISA试剂盒

小鼠多不饱和脂肪酸(PUFA)ELISA试剂盒酶联免疫吸附实验，是目前广泛应用于各种抗原抗体检测的方法，主要有灵敏度高和特异性强的特点。免疫检测法的精确性表现为单次实验孔间 
（批内）的重复性和多次实验之间（批间）的重复性。CV值高则表明精确度低，通常由以下两个原因造成：
移液技术：移液时，枪头应对准孔中央，避免接触孔壁及底部；移液后轻轻晃动混匀试剂；如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响；吸液时等待片刻使体积平衡后再取出；移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正；必要时请检查移液器并重新校正；加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染；确保使用合适的枪头；不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积

洗涤技术：如果使用自动洗板机或多通道移液器，请确保进出口能正常运作；最后一次洗涤后，翻转酶标板倒出多余的洗涤液，并在吸水纸上拍干液体。洗板太快或太慢都会降低精确度。不能让孔内液体自然风干，需立即进行下一步操作；按照说明书，添加足量的洗涤液至孔内，并保证洗涤完全；由于洗涤液不是通用的，当试剂盒内的洗涤液用完时，请不要使用其他试剂盒中的洗涤液。如有需要，可联系技术支持寻求帮助；不要减少洗涤时的浸泡时间或跳过浸泡的步骤；按照说明书上推荐的洗涤次数清洗，随意改变洗涤的次数会影响实验的精确性。

小鼠多不饱和脂肪酸(PUFA)ELISA试剂盒操作步骤看似简单，整个测定过程中却有诸多影响因素，导致检测结果可能与实际结果偏差较大。为帮助大家分析实验中常见问题，我们将常见问题的可能原因和解决方法归纳总结： 

一、高背景或阴性对照值偏高问题及解决方法
1.阴性对照孔被阳性对照或样品污染：洗涤时，勿将洗液溢出孔外
2.抗体非特异性结合：封闭液不适合，更换封闭液
3.酶结合物过浓：请检查酶结合物是否按说明书规定稀释
4.孵育温度过高：检查孵育箱的温度是否正确、稳定
5.底物在使用前曝光：应保存在暗处，避光
6.读板前停留时间过长：加终止液后3分钟内读数

二、阳性对照值偏低或低吸光度
1.试剂未平衡至室温：实验开始前，将试剂盒从冰箱取出平衡至室温
2.检测体积偏小：检查移液器吸液管道是否堵塞
3.孵育时间过短：使用计时器，准确孵育时间 
4.底物受污染：使用新配置的试剂，重新实验
5.包装袋中有湿气：检查袋中是否有干燥剂 
6.样本中有抑制剂：叠d钠会抑制HRP酶的活性 

三、标准曲线不佳
1.倍比稀释标准品时未混匀：稀释标准品的每一步均需混匀
过早稀释：标准品在快要使用时稀释
加入的体积不正确：使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中

四、标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号
1.样本中无检测物或检测物含量极低：设置内参，重新实验
2.样本中其他物质影响/掩盖检测：作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率
3.样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值：适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内

五、重复性较差
1.微孔中有气泡：用针尖挑破气泡
2.试剂未混匀：确保充分混匀试剂
3.样本中有杂质或沉淀物：使用前离心
4.微孔包被面被吸头划破：加液时小心操作
5使用用过的封板胶纸：每次须使用新的封板胶封住反应孔