北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销
规格：50次
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN3080
本试剂盒是我们公司自主开发的独特产品，其原理完全不同于异硫*酸胍/酚/*仿提取方法，克服了后者不能区分RNA(本质上是多糖)和其他植物多糖的缺点，能高效将RNA和其他植物多糖分开，同时还能有效去除多酚和其他植物次级代谢成份。其有效性在近五十多种各类植物(见附录，包括十分棘手的松柏类植物)中得到验证。

试剂盒特点：
1.适用于绝大多数植物，从五十多种植物材料中都成功提取到了总RNA，其中包括松针、柏树、香蕉等用胍/酚/*仿方法未能提取到RNA的植物(注：部分植物组织，如果实，RNase含量极高，需要另外加RVC抑制其活性)。
2. 操作简单快速，最短可以只需要约十五分钟，可以全在室温下进行。
3. 得到的RNA平均 OD260/280在1.9左右，可直接用于RT-PCR和Northern等研究。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1、准备
a)估算试剂和组织细胞的用量并准备足够的*仿、75%乙醇和RNA溶解液(如RNApreserve、无RNase的水或有灭活残留RNase活性的液相RNase清除剂)。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
b)溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解。
2、匀浆
a)先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒，将不超过1mL的匀浆液转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。有的植物组织(果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
b)如果用砚磨法破碎植物组织，需将植物组织浸泡在1mL溶液A中再砚磨，尽量避免植物组织跟空气直接接触，然后将砚磨物转移到新的1.5mL离心管中。
3、第一次分相
a)在装有裂解物的离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
c)将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
4、第二次分相
a)在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
b)室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
c)将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
5、沉淀
a)在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。如果提取 50mg以下的微量植物组织样品，最好在此步加入我们公司的微量助沉剂RNApp。
b)室温12000～15000g离心3～5分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
c)小心移弃上清液，避免触及管底RNA沉淀。
注意：如果加入溶液D离心后沉淀漂浮在上面，说明植物糖份多，溶液比重大，可以少加植物样品，也可以适当加无RNase的水稀释直到沉淀能够沉下去为止。如果离心后管底有类似*仿的相出现，说明上一步离心时间不够或取上清时取到了下层的有机相，可以适当延长离心时间或取上清时留下约100μl不取或在第四步时加0.3mL的自备*仿。
6、第一次清洗
a)在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
b)室温12000～15000g离心1分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
c)小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
7、第二次清洗
a)重复第六步一次。
b)短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液,注意不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
8、溶解
a)加入适量(一般为20-100μl)RNA溶解液使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。
9、检测
a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或我们公司的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。
跟动物一样，植物果实和种子的RNA一般有三条电泳带，但植物叶片的RNA有四条或更多rRNA带，多余的RNA来源于叶片中大量存在的叶绿体。
b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液pH相关，而DEPC水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液pH降低进而降低RNA的光吸收。RNA的产率还随组织的营养状态和组织的种类不同而不同，100mg种子的RNA产量一般为100-120μg，100mg叶片为30-60μg，100mg果实为20-40μg。
c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我们公司的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用我们公司优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
Q：为何提取的RNA电泳时带型不清楚或根本没有条带？
A：可能原因：
  1、电泳没有使用MOPS缓冲液+甲醛变性胶；
  2、没有使用RNA专用的上样液或使用的RNA专用的上样液放置时间过长；
  3、植物组织样品中RNase很多，可以使用RVC(部分植物果实需要此处理)；
  4、植物组织中含多酚等影响提取的物质(如松柏等植物)，可以在溶液A中加入终浓度为0.1 M的硼*化*。

我公司的北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
*化胆碱 NAM 67-48-1
BL0839 羊抗人IgM纯化抗体
ARB11365 人前白蛋白(PA)elisa检测操作说明书 Human prealbumin,pa ELISA KIT
L-苹果酸 trans-4-Methoxycinnamic acid 97-67-6
硫*(代"酸")鱼精蛋白溶液(10%)   5ml
ARB13348 牛三碘甲状腺原*酸(T3)定量分析 
ARB13018 小鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)elisa检测操作说明书 Mouse ldl-ic ELISA KIT
J0303                 兔抗猪IgG(H+L)抗血清                       
金胺-酚染色液   3×20ml
NF-202 羊抗人APO-B血清
BL0884 兔抗猴IgG免疫血清 0.5ml
十四烷基三甲基*化铵 4-Nitrophenyl α-D-mannopyranoside 1119-97-7
北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销关键词：植物RNA提取试剂盒,BTN3080,Plant RNA extraction kit


·3M乙酸*溶液(pH5.2)
编号：BTN101202
规格：250mL

·一站式TA克隆试剂盒
编号：BTN90801A
英文名称：One-Stop TA Cloning Kit(A)
规格：20次
TA克隆就是利用T载体两个3´端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3´端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行TA克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5´端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次TA克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T3和T7 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
 

成分	规格
即用型蓝白T载体(50ng/μL)	20μl
对照插入片段(50ng/μL)	5μl
T4快速连接缓冲液，2×	100μl
T4 DNA连接酶(5U/μL)	30μl
超纯水	1ml
高效感受态细胞	100μL×10只(只B型有)
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。感受态细胞需要干冰运输，-70℃保存，有效期6个月。

自备试剂：插入片段。

使用方法：

一：PCR产物的纯化和定量注意事项
1. 由于PCR体系中有大量会抑制DNA连接反应的dATP、还有一些可能在电泳胶上不一定会显示出来的非特异性扩增产物和引物二聚体，所以PCR产物必须用胶回收方法制备才能用于本试剂盒的连接。可以分别使用本公司柱式DNArc(BTN60202)和PAGE DNArc(包括柱式PAGE DNArc)从琼脂糖胶和PAGE胶上纯化回收PCR片段。具体操作见相关产品使用手册。
2. 琼脂糖胶回收的电泳缓冲液最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
3. 为避免UV对DNA的伤害，切胶最好在日光下进行(使用百奥莱博的绿如蓝染料的话，可以直接在黑色背景下看见DNA条带，不需要紫外光)。如果使用EB或其他染料，必须在紫外下切胶时，最好选择长波(360nm)紫外灯并以最快速度切胶，文献报道短波UV(300nm和240nm)会使DNA连接效率降低400多倍。使用短波UV时，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)减少伤害。
4. PCR片段的体积越小越便于后续操作。洗脱PCR片段时，用最少量的洗脱液洗脱。
 本试剂盒要求PCR回收片段的浓度最好为50ng/μL。如果浓度不够，最好用醇沉淀法沉淀后直接在管内设置连接反应，也可以使用本公司的核酸浓缩剂(BTN110801)直接浓缩。
5. 为准确定量回收的PCR产物同时又节约样品，最好使用微量分光光度计(只需用1μL样品测量)。如果分光光度计需要大量样品，建议使用电泳法定量：将回收的PCR片段与浓度已知的DNA Marker在含EB或绿如蓝染料的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的相对荧光强度而估测PCR产物的浓度。

二：连接反应
1. 短暂离心装有蓝白T载体、连接缓冲液和T4连接酶的离心管。
2.在三个离心管中加入下列成分(注意，对照可以不做，在出现问题时再做)：

成份	样品管	阳性对照管	自连对照管
T4快速连接缓冲液，2×	5μl	5μl	5μl
蓝白T载体(50 ng/μL)(=0.03 pmol/μL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR 纯化产物(0.03-0.1 pmol/μL)	Xμl(见注)	不加	不加
对照插入片段(50ng/μL)(=0.06 pmol/μL)	不加	1.5μl	不加
T4 DNA连接酶(5U/μL)	1-1.5μL	1-1.5μL	1-1.5μL
超纯水	补到10μL	补到10μL	补到10μL

注: 如何根据T载体的用量计算PCR纯化片段的最佳用量？
第一：确定插入片段与载体的最佳摩尔比，在本产品的T载体的长度固定(3Kb)时，最佳摩尔比跟插入片段的长度关系如下：

插入片段长度	与载体的摩尔比
1Kb以下	2:1或3:1
跟T载体接近(±1Kb)	1:1
比T载体长1Kb或更多	1:2或1:3

第二：根据选定的最佳摩尔比按下面方程式计算用量：

本产品提供的T载体长度为3 Kb，推荐用量为50ng，如果PCR片段长度为0.5 Kb，最佳摩尔比设定为3:1，则其用量为:

3. 用移液器吹打连接反应液使之混匀，然后放置在16℃孵育30分钟-过夜。
4. 65℃5分钟灭活连接酶后直接用于转化或-20℃保存。

三：细菌转化及筛选(仅供参考，本产品不提供相关试剂)
1. 将100μl转化效率在1×108 cfu/μg以上的感受态细胞于冰上解冻。
2. 取5-10μl连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。
3.在冰上放置30分钟。
4. 将离心管放42℃热休克90秒，然后快速将其转移到冰浴中放置1～2分钟。
5. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时复苏细胞。
6. 将100μL复苏涂布到含Amp的LB琼脂平板上(也可加上X-gal和IPTG)。
7.室温4,000rpm离心剩余的900μl复苏细胞5分钟，弃去800μl上清，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
8. 将平板置于室温直至液体被吸收。此步非常重要，否则培养板将在37℃排除水分，细菌将随水在培养基上到处游动，不能形成单个菌落。
9. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。一般情况下阳性对照组总共会有上千个菌落(100μl转化液产生的菌落数×10)，自联对照只有少数几个菌落，样品组的菌落数取决于PCR回收片段的质量。
10. 按常规方法筛选重组子。

MCS位点：



北京现货植物RNA提取试剂盒特价促销关键词：植物RNA提取试剂盒,BTN3080,Plant RNA extraction kit

F030508 FITC标记兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA*FITC
ARB12323 大鼠肝细胞生长因子(HGF)elisa检测 Rat hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
BL1280 酚：*仿：异戊醇 125：24：1(PH≥7.8) 
BL1263 核酸纯化柱(大柱)
BTN100873 尿素 Urea
去*抗坏血酸 Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH 490-83-5
BL1379 4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(PH=6.8)
ARB11750 人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3(EAR3)尿液中含量检测 Human eosinophIL-associated ribonuclease a family member 3,ear3 ELISA KIT
SSPE缓冲粉剂(20×)   1L
乙*(代"烯")利 C12E8 16672-87-0
27025-41-8 L-谷胱甘肽(氧化型)/氧化型谷胱甘肽
60-18-4 L-Tyrosine  L-酪*酸
120-23-0 β- Naphthoxyacetic acid (BNOA) β-*氧乙酸
BTN131005 cDNA第二链合成试剂盒 Second Strand cDNA Synthesis Kit
高效血液总RNA提取试剂盒 
ARB10392 人可溶性半乳糖苷结合凝集素3(LgAls3)酶联免疫定量检测 Human lectin-galactose binding-soluble 3,lgals3 ELISA KIT
ARB11414 人结肠癌抗原(CCA)定量分析 Human colon cancer antigen,cca ELISA KIT
3,5-二*-L-酪*酸 Diphenylaminesulfonic acid sodiu*(代"m") salt 300-38-9
HC0149 大龙吸头
ARB13285 小鼠横纹肌辅肌动蛋白α(sm ActInIn-α)检测服务 Mouse skeletal muscle actinin-α,sm actinin-α ELISA KIT
ARB10859 人抗突触前膜抗体(PsmAb)酶标法分析 Human anti-presynaptic membrane antibody,psmab ELISA KIT
56-41-7 L-Alanine L-丙*酸

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