北京现货酵母DNA提取试剂盒打折促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货酵母DNA提取试剂盒打折促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货酵母DNA提取试剂盒打折促销
编号：BTN130990
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：Yeast DNA extraction kit

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·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

 

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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福尔马林固定液(10%)   500ml|5L
ARB11020 人尿蛋白(UP)ELISA代测服务 Human proteinuria,up ELISA KIT
BL0456 MOPSO 3-(N-吗*(代"啡")啉)-羟基丙磺酸
ARB10904 人抗鼠抗体(HAMA)Elisa方法检测 Human antimous antibody,hama ELISA 
γ-谷*酰-3-羟基-4-硝基*(代"*")胺单胺盐 Methyl β-D-glucopyranoside 63699-78-5
ZCNXQ04 特级胎牛血清 500ml
Heinz小体染色液(耐尔蓝法)   10ml
BL0930 RBITC标记羊抗鸡IgG抗体
H0101 胎牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
内源性酶封闭液(H2O2法)   100ml
ARB13526 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)Elisa定量检测 Rabbit bcl-2 assaciated x protein,bax ELISA KIT
ARB10528 人他克莫司(FK506)酶联免疫定量检测 Human tacrolimus-fk506 ELISA KIT
L-脯*酸苄酯盐*(代"酸")盐 C12E10 16652-71-4
9012-36-6 Agarose 琼脂糖(西班牙原装)
BTN60202 柱式DNA胶回收试剂盒 Column DNABACK
Tris-甘*酸电泳粉剂(1×)   10×1L
ARB11796 人碱性胎儿蛋白(BFP)Elisa定量检测 Human basic fetoprotein,bfp ELISA KIT
SJ0686 200bp
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·甲叉双丙稀酰胺(电泳级)
编号：BTN100877
英文名称：Bis-Acrylamide
规格：25g
N,N"-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(Bis-Acrylamide)，又名亚甲基双丙*(代"烯")酰胺，次甲基双丙*(代"烯")酰胺，N,N"-甲撑双丙*(代"烯")酰胺。CAS号是110-26-9。它是一种白色白色或微黄色晶体粉末，无味，吸湿性极小。遇高温或强光则自交联，微溶于水、乙醇，溶于丙*(代"酮")，微溶于*。是一种用于制备聚丙*(代"烯")酰胺凝胶的交联试剂。

储存条件：常温运输及保存、防潮，有效期两年。
注：本产品属于中等毒性物质，主要引起神经系统毒性。

·6nt随机引物(0.5 ug/uL)
编号：BTN100409
英文名称：Hexamer
规格：5μg
本产品为长度为6nt的随机引物，序列为5´-(NNNNNN)-3´，主要用于以任何RNA为模板合成cDNA，也可以用于DNA探针的随机引物标计。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

疑难解答：
Q：在合成cDNA时，使用Oligo dT12-18和用随机引物有何区别？
A：只有当以带polyA尾巴的RNA作为模板才能使用Oligo dT作为引物，而任何RNA模板都可以使用随机引物。使用后者的序列覆盖率比使用Oligo dT更高。

·PCR法DNA探针生物素标记试剂盒
编号：BTN90604B
英文名称：PCR DNA Labeling Kit(Biotin)
规格：5次
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR，最后得到的PCR产物将带有标记，可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下：


产品特点：
1.一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针，也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP，90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记)，有效降低了空间阻碍，检测效果最佳。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。

试剂盒组成：

成分	规格
2×标记专用PCR Mix	500μl
dNTP，2mM each	50μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP	25μL(仅B有)
含DIG-11-dUTP的dNTP	25μL(仅C有)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：标记专用PCR Mix不含dNTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物，使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少，探针杂交信号强度减弱；过长则非特异杂交增加，背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵，所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记，而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率，即先制备非标记PCR产物，再以之为模板制备标记的PCR产物。
二：非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系：

成份	用量
2×标记专用PCR Mix	25μl
dNTP，2mM each	5μl
自备的探针引物一(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的探针引物二(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的模板DNA	1μg基因组DNA或1ng质粒DNA
超纯水	补到50μL

5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意：最好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三：标记PCR反应(最好做一个不加标记的对照用于定量)
说明：在设置下面反应时，如果加一种引物，就得到单链标记的PCR产物；如果加两种引物，则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用，但杂交时变性的双链彼此还会复性，这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争，降低杂交效率，因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。

成份	样品	对照
2×标记专用PCR Mix	25μl	25μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP	5μl	不加
dNTP，2mM	不加	5μl
双链标记：探针引物一和引物二 单链标记：探针引物一或引物二	每种50 pmol 一种50 pmol	每种50 pmol 一种50 pmol
上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng)	10 ng	10 ng
超纯水	补到50μL	补到50μL

 注意：本试剂盒提供的dNTP混合物中，标记底物与非标记底物的比例已经进过优化，如果自备标记dUTP，其与dTTP的最佳比例需要优化，标记不同，比例不同。对DIG-11-dUTP，最佳比例1：3；对BrdUTP，最佳比例为1：1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR，但需要进行下列修改：一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物，探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构，效果反而更好)，所以可以增加循环数；二是延伸时间增加15秒，因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢；三是降低复性温度5-7℃，因为标记核苷酸参入到DNA后，新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量：取标记反应和对照反应的产物1-5μl，在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳，并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素，地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
 注意：如果扩增的是单链DNA探针，其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的，而单链DNA没有碱基对，只有一些局部区域折叠形成的有限双链区，因此能结合的EB很少)，因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度，可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化，直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化，请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。

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