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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
391
- 英文名:
Firefly Luciferase Assay Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输,-20℃或-80℃避光保存,有
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
规格:100次
品牌:百奥莱博
英文名:Firefly Luciferase Assay Kit
本试剂盒采用通用裂解缓冲液,能与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。本产品与海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒共同使用,可进行一体化的双荧光素酶检测。
报告基因检测是真核基因表达调控研究的常用方法。因为检测光量子的方法非常敏感,所以生物发光法是报告基因检测最常用的手段。荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化,发射出光子。萤火虫荧光素酶催化的发光反应,具有很好的浓度线性范围(7~8个数量级的线性范围),酶的检测灵敏度达到10⁻²ºmol。原理如下:

试剂盒特点:
1.高度灵敏:可检测10⁻¹⁸~10⁻²ºmol荧光素酶。
2.线性范围宽:线性范围达到7~8个数量级。
3.快速简便:特别适合于高通量筛选。
4.兼容性好:与其它常用报告基因检测试剂兼容。
5.本产品可足够100次荧光素酶检测。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 5×Universal Lysis Buffer (通用裂解缓冲液) |
20mL |
| Fassay Buffer | 10mL |
| Fassay Substrate(底物) | 0.5mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃或-80℃避光保存,有效期半年。
使用方法:
★裂解细胞:
1. 配制裂解液:临用前,取适量5×Universal Lysis Buffer(ULB),用双蒸水稀释至1×ULB,混匀。1×ULB可在4℃存放数周。
2. 清洗细胞:倾去培养板/皿中的培养液,加入足量PBS ,轻轻洗涤细胞。完全倾去洗涤液。
3. 裂解细胞:按照下表中推荐的体积,在孔/皿中加入1×ULB ,混匀。培养板可在微型振荡器上震荡5-10分钟;培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞,将细胞悬液移入1.5mL离心管,在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定,也可离心30秒,取上清液做发光测定。
表:不同孔/皿所需1×ULB体积
| 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 35mm平皿 | 60mm平皿 |
| 50μL | 80μL | 150μL | 250μL | 500μL | 500μL | 1000μL |
★配制发光反应液:
测定前,室温溶化Fassay Buffer和Fassay Substrate,混匀。按20/1比例用Fassay Buffer稀释Fassay Substrate,配制所需体积的Fassay Reagent(注意避光)。
★测定仪器的设置:
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器,将测读时间设为10~20秒。自动操作型仪器,一般将测定延迟设为2秒,将测读时间设为10~20秒,Fassay Reagent的注入体积设定为100μL。
★手动发光测定:
取待测样品20μl加入测量管底部,取Fassay Reagent 100μL立即加入管底部,轻轻敲击管壁3~5次混匀,放入仪器中立即测定,记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。如用多孔板同时手动测定多个样品,则将各待测样品20μL分别加入连续的各孔底部,用多道加样器于各孔底加入Fassay Reagent 100μL,轻轻敲击板侧3~5次混匀,放入仪器中立即测定,记录发光值为Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
★自动发光测定:
配制好的Fassay Reagent置于测定仪内并连接好对应管道。取待测样品20μL分别加入测定管/板孔底部,启动自动测量程序。记录Firefly luciferase的发光单位(RLU)。
注意事项:
1.Fassay Substrate(底物)溶液应密封、盖严存放,避免蒸发。Fassay Buffer和Fassay Substrate(底物)应避免反复冻熔,可分装成合适体积分次使用。
2.1×细胞裂解液一般在当天测定。如需隔日测定,应将样品于-20℃保存。长期保存应在-80℃。
3.用多孔板同时手动测定多个样品时,要尽量缩短样品间试剂加入的时间间隔。
4.本产品与海肾荧光素酶活性检测试剂盒联合使用,可进行一体化的双荧光素酶检测。
关于萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒哪里卖的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·大肠杆菌XL10-Gold化学感受态细胞
编号:BTN140431
英文名称:E.coli XL10-Gold Chemical Competent Cell
规格:0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌XL10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。本产品适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定复制,还适合非甲基化DNA的转化。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达108。本感受态细胞具有四环素和*霉素抗性。
菌株基因型:Tetr D(mcrA)183 D(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F- proAB lacIqZDM15 Tn10(Tetr)Amy Camr]
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒哪里卖关键词:萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒,BTN130597,Firefly Luciferase Assay Kit
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文献和实验生物发光是一种依赖于酶和底物的相互作用来产生光的化学过程。所需的酶被称为荧光素酶,底物因荧光素酶的类型而不同(如荧光素)。 常用荧光素酶信息表: 其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶,分别命名为萤火虫荧光素酶(FLuc)和海肾荧光素酶(RLuc),同时近年来研究得较多的是来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶(GLuc)。 萤火虫荧光素酶(FLuc)作为最通用和最常见的报告基因,该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性,可用于原核和真核细胞。FLuc
表达,以此来进行选择最后的融合位置。 表 1. 常用荧光蛋白特性 荧光素酶 荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称,其中主要有萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,FLuc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,RLuc)。荧光素酶报告系统非常灵敏,可以高效地检测基因的表达和细胞的活动情况,是分析转录因子与启动子活性、miRNA 与靶基因相互作用以及活体成像等的有效方法。 萤火虫荧光素酶(FLuc):FLuc 的底物是荧光素,催化
8.裂解产物与底物混合(手动加样):要求混合快速、混合时间一致,避免荧光素酶衰变的影响。 9.发光半衰期: a)单荧光素酶检测试剂盒(E1500),萤火虫荧光素酶的发光半衰期约12min b)双荧光素酶检测试剂盒(E1910),萤火虫荧光素酶的发光半衰期约9min,海肾荧光素酶的发光半衰期约2min 10.检测结果 检测前应检测
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