一站式MBP标签蛋白纯化套装现货价格

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百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式MBP标签蛋白纯化套装现货价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式MBP标签蛋白纯化套装现货价格
品牌：百奥莱博
规格：2mL
编号：BTN130871
英文名：One-Stop MBP-Tagged Protein Miniprep Pack
产地：国产|进口
MBP(麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为40 kDa，由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除MBP融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。由于MBP融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中MBP常作为融合蛋白被广泛应用。本产品就是专门用于分离纯化MBP融合蛋白的试剂盒，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2．提供 2mL直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质。
3．采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	规格
直链淀粉-琼脂糖介质	2ml
1 M Tris-HCl(pH7.4)	25ml
0.1 M EDTA溶液	25ml
2 M NaCl溶液	50ml
蔗糖	20g
PMSF(10mg/mL)	1ml
0.1mM MgCl2溶液	50ml
0.1 M麦芽糖溶液	25ml
层析柱(6mL)	1支
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，PMSF需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据MBP蛋白产量决定，其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2．用5倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积，下同)自备去离子水洗柱，共3次。
3．用5倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。结合缓冲液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在结合缓冲液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
2M NaCl溶液	1mL	200mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，将细胞沉淀(约100mg)悬于2mL冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000g离心15分钟收集细胞沉淀后，再次悬于2mL冰冷的细胞洗涤液中。(最好用不加诱导物的菌液做对照样。)细胞洗涤液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞洗涤液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.1mL	10mM
2M NaCl溶液	0.15mL	30mM
自备去离子水	9.75mL	-

5．制备细胞裂解物：
1)如果所用载体不带MBP信号肽序列(如pMAL-c2)
a)超声破碎细胞，功率30 W，保持细胞低温(0℃)，直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。)
b)为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入35μl PMSF(10mg/mL)。
c)4℃下13000-15000g离心30分钟，以去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
2)如果所用载体带MBP信号肽序列(如pMAL-p2)
a)4℃ 5000g离心15分钟收集细胞，沉淀悬于1mL冰冷的现配的细胞裂解液中。细胞裂解液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在细胞裂解液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.3mL	30mM
0.1M EDTA溶液	0.01mL	0.1mM
蔗糖	2g	20%(m/V)
自备去离子水	加水到10mL	-

b)加入25μl PMSF(10mg/mL)，室温搅动15分钟，于4℃ 13000-15000g离心10分钟收集细胞。
c)旋动细胞沉淀，加入2mL冰冷的0.1mM MgCl2溶液，4℃搅动10分钟。
d)休克细胞4℃ 13000-15000g离心10分钟，在上清中加入10mM Tris-HCl(pH7.4)(可将1 M Tris-HCl，pH7.4稀释100倍配制而成)至pH为7.4。
e)上清用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，滤液用100倍体积的10mM Tris-HCl(pH7.4)(配方如上)4℃透析。
f)收集透析后样品，留样做 SDS-PAGE电泳对照，其余样品用于纯化MBP融合蛋白，直接进入第6步。
6．将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率)，收集流出液。
7．用10-15倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8．使用5-10倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液(即目的蛋白组分)。麦芽糖洗脱液的配方如下(以10mL为例)：

成分	用量	在麦芽糖洗脱液中的浓度
1M Tris-HCl(pH7.4)	0.2mL	20mM
0.1M EDTA溶液	0.1mL	1mM
0.1M麦芽糖溶液	1mL	10mM
自备去离子水	8.7mL	-

9．将纯化得到的样品(包括流出液、洗杂液和洗脱液)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
10．填料介质清洗：依次使用3倍柱体积的结合缓冲液和5倍柱体积的去离子水平衡介质，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。本介质可重复使用。
蛋白酶切割释放靶蛋白(可选步骤，所用试剂需自备)
11．用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1)加入自备的凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入50单位的溶于1mL PBS溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2-16小时。
2)4℃以500 g离心5分钟，上清小心转移到新离心管中。
3)用传统的层析方法或SDS-PAGE电泳分离靶蛋白和蛋白酶。

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·核酸内切酶IV
编号：BTN130638
英文名称：Endonuclease IV
规格：1000U
核酸内切酶IV能够作用于DNA分子上的几种氧化性损伤。该酶是一个脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶，水解DNA上的完整AP位点，占E.coli AP酶总活性的10%。切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键，产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有3´二酯酶活性，能从DNA的3´末端释放磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖 5´-磷酸和磷酸。其反应原理图如下：


产品用途：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10⁴～1:10⁵；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋。

产品组成：

成分	规格
Endonuclease IV	100μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：85℃，20分钟。

活性定义：1单位指在 10μl缓冲液体系中，37℃条件下，1小时内能够切割 1pmol含一个AP位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理 10pmol含单一尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。


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BTN130581 小鼠抗mCherry标签单抗 Anti mCherry-Tag Mouse Mab
F050322 绵羊IgG抗体 Sheep IgG
F040108 鸡卵清蛋白偶联莱克多巴胺 OVA-RAC
ARB11569 人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelAtInAse A)检测服务 Human matrix metalloproteinase 2/gelatinase a,mmp-2 ELISA KIT
BL0919 RBITC标记兔抗人IgA抗体
ARB14198 大鼠超氧阴离子自由基(O2·)elisa检测 
ARB10929 人吡哆醛/吡哆醇维生素B6磷酸酶(PDXP)酶免分析 Human pyridoxal/pyridoxine vitamin b6-phosphatase,pdxp ELISA KIT
1390-65-4 洋红 Carmine
PY02-415  WORT琼脂  250克  
多聚甲醛-戊二醛混合固定液(4%/0.5%)   500ml
L0202 小鼠IgM类单克隆抗体腹水纯化试剂盒 
酮康唑 Mucicarmine 65277-42-1
甲基紫 Ponceau 2R 8004-87-3
ARB11428 人热休克蛋白27(HSP-27)ELISA代测服务 Human heat shock protein 27,hsp-27 ELISA KIT
4-[(2,4-二羟基*基)偶氮]*磺酸* H-Glu(OMe)-OMe.HCl 547-57-9
2-硝基*(代"*")甲醛 HOBT 552-89-6
ARB11908 人癌胚抗原(CEA/CD66)血清中含量检测 Human carcinoembryonic antign,cea ELISA KIT
铍试剂II Glass Fiber 51550-25-5
Karasson-Schwlts磷酸盐缓冲液   500ml
BTN130806 胚胎裂解液 Embryonic Cell Lysis Solution
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·动物细胞核蛋白微量制备试剂盒
编号：BTN90613
英文名称：Animal Nuclear Protein Miniprep Kit
规格：25次
DNA只存在于细胞核内，因此参与转录调节和DNA复制的蛋白质主要存在于细胞核中，要研究蛋白质与DNA的相互作用，首先需要制备能够与DNA作用的天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐，一次处理大量样品时尤其不便，为此本公司开发了本产品，用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋白的微量提取。

产品特点：
1. 提取制备过程简便，只需要一小时。
2. 实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。
3.可用于培养的动物细胞，也可以用于新鲜组织细胞。
4. 制备的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲基化干扰实验酶活性测定等研究。
 

成分	规格
溶液A	10ml
溶液B	2.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、4℃保存，有效期一年。

使用方法：
实验前准备：取适当量的溶液A和溶液B置于冰上，在使用前数分钟内分别向溶液A和溶液B中加入自备的PMSF和DTT，使PMSF的最终浓度为0.2mM，DTT的最终浓度为1mM。实验中所用试剂均需先预冷。

一、对培养细胞和悬浮细胞：
1. 对培养细胞：将覆盖率为55-65%的培养细胞用自备的胰酶溶液(BTN90306)按标准的胰酶法处理，然后刮到1.5mL塑料离心管中，4℃ 800g离心30秒，小心弃上清。
2. 对悬浮细胞：直接将5×105-7个的悬浮细胞转移到1.5mL塑料离心管中，4℃800g离心30秒，小心弃上清。
3. 用1.5mL自备的预冷的PBS缓冲液洗涤细胞沉淀一次，然后4℃离心后弃上清。
4.在细胞沉淀中加入400μL预加了PMSF和DTT的溶液A，用手指弹管壁使沉淀悬浮起来。
5. 冰浴10分钟，涡旋激烈震荡10秒混匀。
6. 4℃ 2500g离心10秒，小心弃上清。
7.在沉淀中加入100μL预加了PMSF和DTT的溶液B，轻轻混匀使沉淀悬浮起来。
8. 冰浴 20分钟。
9. 4℃ 12000-16000g离心10分钟，小心收集上清液(细胞核提取物)，可立即用于后续的凝胶滞后实验、BCA法蛋白浓度测定或活性检测等实验，也可以分装后放-70℃长期保存。
 说明：本方法可以从1×10⁶的细胞中得到50-70ug的核蛋白质。

二、对新鲜组织：
10. 将100-150mg 新鲜组织置于培养皿中，用手术剪将组织尽可能切成非常细小的碎片，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用自备的预冷的PBS洗涤2次，离心后去上清。在组织沉淀中加入400μl预加了PMSF和DTT的溶液A，冰浴或4ºC下在Dounce或Potter 玻璃匀浆器(BTN101103 ，可向本公司订购)内充分匀浆，一般上下手动匀浆30-50次(匀浆后应镜检，细胞破碎率不小于90%，同时没有明显的组织小块)。
11. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，用手指弹管壁使沉淀悬浮起来，冰浴放置10-20分钟，涡旋激烈震荡10秒混匀。
12. 接下来按照步骤6-9操作，即得到新鲜组织细胞核蛋白提取物。

注意事项：
1. 所有接触样品的用具和试剂均需预冷，以免蛋白质的降解及失活。
2. PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
3. 本试剂盒只适用于新鲜的组织样品，对冻存过的组织抽提效果不是很理想。

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