北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发
规格：500次
英文名：BCA Protein Assay Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid，二奎啉甲*(代"酸")法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品，BCA法跟Lowry法的第一步完全相同，就是在碱性条件下，蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2，双缩尿)发生的反应，故又叫Biuret反应(Biuret反应本省就可以测定蛋白质浓度，目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步，Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物，通过分光在562nm处测定紫色化合物的量就可以精确定量蛋白质浓度。BCA 检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。


产品特点：
1．对各种常见的去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。
2．比Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
3．试剂稳定，室温可以放置两年。工作液1 天内有效。
4．线性范围在 20～2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL，需要选用超敏BCA。
5．最小测量体积为1-20μL。
6．终产物稳定，变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．可以检测最短到双肽，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
8．有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	2ml
BSA标准品(2mg/mL)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期两年。

使用方法：

一：96 板操作模式
1．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代)：

编号	BSA 标准(2ug/uL)	待测样品(μL)	样品缓冲液(μL)	总体积(μL)	蛋白含量(μg)
0	0	0	20	20	0
1	1	0	19	20	2.0
2	2	0	18	20	4.0
3	4	0	16	20	8.0
4	8	0	12	20	16.0
5	12	0	8	20	24.0
6	16	0	4	20	32.0
7	20	0	0	20	40.0
样品1	0	X	补到20	20	未知
样品N	0	Y	补到20	20	未知

2．计算BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量，然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如：计算出需要5mL工作液，实际按不少于5.5mL的量配制。
3．配制BCA工作液：按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A+100μl溶液B。
注意：取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀，溶液B非常容易形成沉淀，需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时，最初会出现淡绿色沉淀，轻微晃动沉淀即会消失，工作液最后成绿色，可以室温放置12 天，但需要将容器的盖子拧紧。
4．将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
5．37℃放置30分钟。
6．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，使光吸收值慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
7．在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
8．将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
9．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
10．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μl)，乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。

二：试管测定模式
1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL，样品的总体积从20μL 改为100μL，BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。

三：注意事项
1．BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育30分钟或更长。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：

名称	在此浓度下不受影响
Ammonium Sulfate	1.5 M
Brij-35	5.0%
CHAPS	5.0%
EDTA	10mM
Hepes	100mM
Glycine，pH2.8	100mM
Guanidine HCl	4.0 M
Tween 20、60、80	5.0%
SDS	5.0%
Sodium Acetate pH5.5	200mM
Sodium Chloride(NaCl)	1.0 M
Sucrose	40%
Sodium Hydroxide(NaOH)	0.1 M
NP-40	5.0%
Triton X-100	5.0%
Urea	3.0 M

4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。

我公司的北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·一站式GST标记蛋白质微量纯化套装(含溶菌酶和核酸酶)
编号：BTN111116B
英文名称：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。


北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发关键词：BCA Protein Assay Kit,BCA法蛋白定量试剂盒,BTN80815


·Southern级血液DNA提取试剂盒
编号：BTN130931
英文名称：Blood DNA extraction kit(Southern Grade)
规格：10次

·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH9.0)(不含RNase)
编号：BTN80933
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL

·T4 DNA连接酶
编号：BTN60609
英文名称：T4 DNA Ligase
规格：200U
T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68KDa的单亚基组成。

产品用途：
1．催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5´-P末端和3´-OH末端之间形成磷酸二酯键。
2．修复dsDNA反应中的切口(Nick)。
3．催化pyrophosphate和ATP之间的磷酸交换反应(Weiss酶单位定义原理)
4．需要ATP、Mg2+和DTT，最佳pH为pH7.5-8.0。
5．NaCl浓度在200mM以上时有抑制作用。
6．1%～10%PEG和150～200mM NaCl能促进连接反应(尤其是平末端DNA)效率。

产品组成：

成分	规格
T4 DNA连接酶(5U/μL)	40μl
10×T4连接酶Buffer	300μl
说明书	1份

注意：本公司本产品的单位按Weiss 单位定义，200个Weiss单位相当于25000个连接单位，1000个Weiss 单位相当于125000个连接单位。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(DNA片段和载体DNA的连接)
1．在微量离心管中制备下列连接反应液

10×T4 DNA Ligase Buffer	2.5μl
自备插入DNA片段	约0.3pmol
自备载体DNA	约0.03pmol
T4 DNA Ligase	1μL
dH2O	up to 25μL

2．16℃过夜反应
3．加入2.5μL的3M醋酸*(PH5.2)
4．加入62.5μL的预冷无水乙醇，-20℃放置30-60分钟
5．离心回收沉淀，用70%的预冷无水乙醇清洗沉淀，真空干燥
6．25～50μL TE溶解，10-20μL转化至100μL感受态细胞中。


北京现货BCA法蛋白定量试剂盒批发关键词：BCA Protein Assay Kit,BCA法蛋白定量试剂盒,BTN80815

DL-赖*酸 OA 70-54-2
Tris抗原修复液(10×,pH9.0)   100ml
BL1293 考马斯亮蓝快速染色液
ARB11223 人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)血清中含量检测 Human cytokeRatin fragment antigen 21-1,cyfra21-1 ELISA KIT
BTN81223 增强型DAB显色试剂盒 Enhanced DAB Chromogenic Kit
CYB167036 羊抗猪IgG
ARB10926 人克拉拉细胞蛋白(CC16)Elisa定量检测 Human clara cell protein,cc16 ELISA KIT
DAPI染色液(5ug/ml,含封片剂)   10ml
BL0974 牛外周血淋巴细胞分离液
4-硝基乙酰**(代"胺") 3,4-Dihydroxybenzoic acid 104-04-1
ARB12614 大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)elisa检测说明书 Rat lymphocyte function associated antigen 3,lfa-3 ELISA KIT
无机磷检测试剂盒(紫外分光光度微板法)   100T
ARB13229 小鼠羟脯*酸(Hyp)酶联免疫定量检测 Mouse hydroxyproline,hyp ELISA KIT
19-119kDa预先染色分子量MARK U 5′-P

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