一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装批发是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装批发
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN130881
规格：30次
英文名：One-Stop Acetic Acid-Urea PAGE Pack

关于一站式乙酸-尿素PAGE电泳套装批发的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·红霉素溶液
编号：BTN120690
英文名称：Erythromycin Solution
规格：10mL
本产品为溶于2N HCl浓度为100mg/mL的红霉素溶液。红霉素(Erythromycin A；Abomacetin；EMcin；Eritrocina；Erycen；Staticin；Retcin；Stiemycin)，分子式：C37H67NO13，分子量：733.93，CAS号：114-07-8 。溶于乙醇。红霉素是由红霉素链霉菌(Streptomyces erythreus)所产生的大环内酯(macrolide)系的代表性的抗菌素。主要对革兰氏阳性菌具有抗菌性。

抗性机制：在转肽步骤抑制肽链延长，与核糖体结合抑制细菌蛋白合成，对细菌诱发红霉素抗性。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)
编号：BTN100903
英文名称：AFLP Kit(EcoRI-MseI)
规格：1600次
本产品在传统AFLP-PCR的基础上经过精心优化而开发。AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合RFLP和PCR技术特点的、迄今为止最有效分子标记分型技术，其原理如下：


产品特点：
1．一站式，足够50次酶切-连接反应、50次预扩反应和1600次AFLP PCR(PCR按30μL体系计算)，但不包括DNA 纯化和带型分析试剂(如PAGE电泳试剂和银染试剂)。
2．本系列产品提供EcoRI-MseI 组合，适用于GC含量在50%以上的基因组。对GC含量在50%以下的基因组，需从本公司采购AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3．各种参数都经过优化，一次PCR所得AFLP片段数一般在10-100之间，可重复性好，误差小于0.6%。
4．本产品适用于基因组在500 Mb-6000Mb的材料(如动物和植物)，对于基因组在50-500Mb的材料(如细菌和真菌)或50Mb以下的材料(如质粒，cosmid，BAC，YAC和PAC等)，需要分别另购专门的+1型预扩引物混合液和+3型EcoRI引物(8 种)AFLP引物对。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酶切-连接Buffer，10×	100μl
EcoRI-MseI酶混合液	100μl
EcoRI-MseI 接头混合物	1ml
T4 DNA连接酶(1U/μL)	50μl
+0型预扩引物混合液	750μl
PCR Mix 3.0	9ml×3
对照DNA(50ng/μL)	20μl
+2型EcoRI引物(8条)	1ml每种
+3型MseI引物(8条)	1ml每种
TE溶液，pH8.0	10ml
超纯水	10ml
说明书	1份

+2型EcoRI引物和+3型MseI引物最后碱基的序列

引物名称	8条引物3´最后碱基
+2型EcoRI引物	-AA,-AT,-AG,-AC,-TA,-TT,-TG,-TC
+3型MseI引物	-CAA,-CAC,-CAG,-CAT,-CTA,-CTC,-CTG,-CTT

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：Southern级DNA纯化试剂，尿素-PAGE电泳套装，银染试剂盒。

使用方法：

一、DNA提取(本试剂盒不提供相关试剂)
用户需要自备50-500ng Southern级别的基因组DNA，用前最好预实验以确保DNA能够被EcoRI和MseI内切酶彻底切开。

二、限制性酶切和接头连接反应(本试剂盒足够50次本反应)
1．在0.2mL离心管中加入设置20μL的限制性内切酶酶切体系：

成分	用量
酶切-连接Buffer，10×	2μl
样品DNA	50ng(对小基因组材料) 500ng(对大基因组材料) 如果用对照，则用5μL
EcoR I-Mse I酶混合液	2μl
超纯水	加水到20μl

2．轻柔混匀并短暂离心后，37℃保温2小时酶切(若PCR 仪器不带热盖，则必须加50μL自备石蜡油，否则水分会蒸发影响反应。下同)，70℃保温15分钟灭活内切酶。
3．在上述酶反应体系中加入20μl EcoRI-MseI 接头混合物和1μl T4 DNA连接酶，轻柔混匀并短暂离心后，20℃保温2小时让接头跟DNA片段相连。
4．在一个离心管中加入10μl上步得到的连接反应液和90μL TE缓冲液，pH8，充分混匀，得到酶切-连接反应10倍稀释液，未用完的酶切-连接反应原液(30μL)可放-20℃保存。

三、预扩增(本试剂盒足够50次本反应)
5．在0.2mL离心管中设置30μl的PCR 体系：

成分	体积
酶切-连接反应液10倍稀释液	5μl
+0型预扩引物混合液	10μl
PCR Mix 3.0	15μl

6．离心数秒，按下列参数进行PCR预扩增：

	温度	时间
PCR(20次)	94℃	30s
	56℃	60s
	72℃	60s

7．可以取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖胶上电泳检测，产物为100-1500bp 模糊条带。
8．将剩下的预扩反应液用TE 稀释50倍，直接用于下步反应或放-20℃保存待用。

四、选择性PCR扩增(本试剂盒足够至少1600次本反应)
9．在0.2mL PCR 管中，加入下列成分(如果用户已经知道哪个一种或几种引物组合适合自己的材料，则直接使用；如果不知道，则需要预先测试所有64 种组合，设置64个PCR反应)，下面只是一种组合：

成分	体积
预扩反应液50倍稀释液	5μl
+2型EcoR I引物之一(八种之一)	5μl
+3型Mse I引物之一(八种之一)	5μl
PCR Mix 3.0	15μl

10．轻柔混匀后离心数秒，按下列参数进行PCR：

	温度	时间
PCR(13次)	94℃	30s
	65℃	30s(每次循环递减0.7℃)
	72℃	60s
PCR(13次)	94℃	30s
	55℃	30s
	72℃	60s
延伸	72℃	5min

五、尿素-PAGE电泳和银染(需另购试剂并按相关说明书进行)


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·农杆菌GV3101化学感受态细胞
编号：BTN140384
英文名称：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。

基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。

注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方：

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素(carb)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
硫*(代"酸")卡那霉素(kan)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
链霉素(strep)	双蒸水溶解	10mg/mL	50μg/mL
利福平(rif)	DMSO溶解	10mg/mL	20μg/mL
庆大霉素(gent)	双蒸水溶解	20mg/mL	40μg/mL

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·胰蛋白酶(质谱级)
编号：BTN131029
英文名称：Trypsin，MS Grade
规格：100μg
胰蛋白酶是丝*酸蛋白酶，可特异性地切开赖*酸和精*酸残基的羧基端。胰蛋白酶这种严格的特异性是蛋白质鉴定的基础。天然胰蛋白酶易于自我水解，产生假胰蛋白酶，后者特异性较广，含有胰凝乳蛋白酶样活性。存在于胰蛋白酶制剂中的这些自我水解产物能产生多余的肽片段，从而干扰质谱检测到的片段的数据分析。

本产品是质谱分析级胰蛋白酶，其能提供最大限度的灵敏度。胰蛋白酶中的赖*酸残基已经过还原甲基化修饰，成为活性高且稳定的分子，抗拒自我水解的性能特别强。纯化的胰蛋白酶的特异性又由于TPCK处理使胰凝乳蛋白酶失活而进一步提高。处理过的胰蛋白酶经过亲和层析纯化，制成冻干粉。本产品能够用于胶内消化、溶液中酶解和质谱分析等实验。

产品特点：
➤ 纯度高，使用TPCK处理过，并经亲和纯化得到。
➤产品质量稳定，每批都经过质谱检测。
➤ 方便使用，以小瓶提供。
➤ 价值高，保证5次冻融循环后，性能稳定，这样使残余试剂量最小。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。干粉溶解在50mM醋酸中后，-20℃保存。若要长期储存，将溶解的胰蛋白酶存于-70℃。将冻融循环限制在5次以内。

使用方法：(溶液中酶解实验举例)
1．将目的蛋白溶解在6M guanidine HCl(or 6～8M urea or 0.1% SDS)，50mM Tris-HCl(pH8)，2–5mM DTT(or β-mercaptoethanol)的溶液中。
2．95℃加热15–20分钟或者60℃加热45–60分钟，自然冷却。
3．分析变性蛋白质时，加入50mM NH₄HCO₃(pH7.8)or 50mM Tris-HCl，1mM CaCl₂(pH7.6)，使guanidine HCl or urea终浓度至少为1M。如果上步已经加入SDS，可以不加入NH4HCO3。分析非变性蛋白质时，将蛋白样品溶解在pH为7-9的缓冲液内即可。
4．加入胰蛋白酶，使胰蛋白酶：蛋白质=1:100～1:20(w/w)。37℃孵育至少1小时。将反应体系移至-20℃或者加入胰蛋白酶抑制剂TCA(终浓度10%)终止酶反应。也可以将反应溶液的pH降到4.0以下，终止酶反应。
5．反相HPLC或者SDS-PAGE分析酶解反应结果。

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