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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
913
- 英文名:
FFPE Total Protein Extraction Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温下运输和保存,但DTT和提取试剂需要
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒库存,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒库存
英文名:FFPE Total Protein Extraction Kit
产地:国产|进口
规格:50次
品牌:百奥莱博
编号:BTN130888
石蜡包埋组织是很重要的临床材料,研究其正常细胞和疾病相关的细胞,特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平,对于判断癌化的进展,癌症的类型的判定,以方便于诊断和治疗有重要的意义,然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水平并不能够真实反映体内细胞的真实状况,因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且加以研究有很重要的意义,本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试剂,在两种不同的温度条件下温育,可以将被铰链的蛋白质释放出来,经过简单的离心步骤,上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后,可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等,本试剂盒可以使用50次左右。
产品特点:
1. 不含有去污试剂,适用于非染色的标本。
2.可以适用于甲醛浸泡的组织标本。
3. 不需要超速离心,可以同时处理多个标本。
试剂盒组成:
| 成份 | 规格 |
| 预处理试剂A | 100mL |
| 预处理试剂B | 5mL |
| 提取试剂 | 5mL |
| 沉淀试剂 | 75mL |
| DTT干粉 | 80mg |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:常温下运输和保存,但DTT和提取试剂需要4℃保存,盛装预处理试剂A的瓶子已经密封,请在使用后,将剩余的预处理试剂A倒入一个有内盖的瓶中,同时盖紧内外盖,以防止挥发。盛装预处理试剂A,B和沉淀试剂的瓶盖要盖紧,同时避免火源。
使用方法:
1. 取两块大约10-15μm厚,100mm2石蜡包埋组织切片到1.5mL的干净离心管中,加入1mL预处理试剂A,高速涡悬震荡30 sec,室温静置5 min,期间偶尔颠倒离心管数次。
2. 加入100μL预处理试剂B,涡悬震荡10sec,再10000rpm(10000g)离心2min,移去上下两层的液体。
3. 用500μL的超纯水清洗脱蜡的组织两次,离心并尽量吸去液体,保留组织块沉淀。
4. 加入100μL提取试剂(用前需要将DTT全部加入到装提取试剂的瓶中,摇晃混匀,未用完的提取试剂需要4℃放置),盖上盖子,涡悬震荡数秒。
5.在水浴锅中100℃加热20 min,短暂离心一下,再用组织研磨棒将切片组织磨碎。
6.在水浴锅中60℃加热2 hour,期间大约每20 min取出,震荡一次。
7. 4℃,12000rpm(12830 g)离心15 min,小心将上清转移到一个新的1.5mL的干净离心管中。注意:在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件下保存一个星期,如果需要长期保存,请放置在-20℃的环境中,同时避免 反复冻溶,也可以使用我公司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒对上清中的蛋白质直接定量。
8. 加入1mL的沉淀试剂,涡悬震荡10 sec,在4℃的环境中保持10 min。
9. 4℃,12000rpm离心15 min,去除上清,保留沉淀。
10. 加入0.5mL的沉淀试剂,涡悬震荡10 sec,在4℃的环境中保持10 min,再4℃,12000rpm离心15 min,去除上清,保留沉淀,在通风橱中将试管倒置在滤纸上,让残余的液体挥发干净。
11. 将固体沉淀溶解于合适的自备的缓冲液中,再4℃,12000rpm离心5 min,收集上清,用于SDS-PAGE,Western blot等实验。注意:此上清中含有DNA,RNA 残留,所以溶液有些发粘,加入少量的micrococcal nuclease,benzonase等消化,有助于减少粘性,但是即使不处理一般不会影响后续实验,用枪头将沉淀捣碎。建议使用含有Thiourea ,Urea,NDSB-201或其它强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶解。
注意事项:
1. 为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率,必须尽量减少在切片制作过程中甲醛固定时间,同时在石蜡包埋前彻底脱水,甲醛固定的时间越长,蛋白质的提取回收效率越低。
2. 尽量取用从石蜡包埋组织块中切取的薄片,或没有封闭到载玻片上的没有经过苏木精等染色的切片。
3. 材料越新鲜或甲醛固定时间越短,蛋白质的回收效率越高。
4. 提取试剂中含有含有刺激性的化合物,操作时要戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻,沾染皮肤 眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
5. 对于甲醛浸泡的组织样本,每次可以取5-10mg的组织样本,用双蒸水洗涤离心收集后后,直接从步骤4开始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫实验,可能需要先进行抗原修复程序,但是如果用Western Blot或Dot blot实验,一般情况下没有必要。
7. 本试剂盒只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果概不承担责任。
北京现货石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒库存极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·*霉素干粉
编号:BTN60102
英文名称:Chloramphenicol Powder
规格:1g
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5,分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5~151.5℃。在干燥时稳定,在弱酸性和中性溶液中较安定,煮沸也不见分解,遇碱类易失效。
结构式:
储存条件:常温运输、4℃保存、有效期一年。
·RNase抑制剂(猪源)
编号:BTN130834
英文名称:RNase Inhibitor From Pig
规格:500U
*霉素是白色至微黄色针状结晶或片状结晶。分子式为C11H12Cl2N2O5,分子量为323.13。真空时升华。无臭,味苦。易溶于醇类,微溶于乙*(代"醚"),不溶于*、石油醚和植物油。水溶液呈中性。熔点150.5~151.5℃。在干燥时稳定,在弱酸性和中性溶液中较安定,煮沸也不见分解,遇碱类易失效。
结构式:
储存条件:常温运输、4℃保存、有效期一年。
·Tricine-SDS PAGE阴极电泳液(干粉)
编号:BTN81226
英文名称:Tricine SDS-PAGE Anode Buffer
规格:10L
本产品为干粉型Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液,加水配制后即可直接使用,非常方便。
储存条件:常温运输和保存,有效期两年。
·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.5)(不含RNase)
编号:BTN60903
英文名称:RNase-Free Tris-HCl Solution
规格:250mL
本产品为干粉型Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液,加水配制后即可直接使用,非常方便。
储存条件:常温运输和保存,有效期两年。
·cDNA第二链合成试剂盒
编号:BTN131005
英文名称:Second Strand cDNA Synthesis Kit
规格:30次
cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链。
产品特点:
1. 即开即用,含有合成cDNA第二链的所有试剂。
2. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 5×cDNA第二链合成缓冲液 | 480μl |
| 20×cDNA第二链合成酶混合液 | 120μl |
| 0.2 M EDTA溶液 | 120μl |
| 超纯水 | 2ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂,用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
1.在冰浴上向已经完成合成cDNA第一条链的反应体系中依次加入下表试剂:
| 成分 | 用量 |
| cDNA第一链合成反应液 | 10μl |
| 超纯水 | 48μl |
| cDNA第二链合成缓冲液 | 16μl |
| cDNA第二链合成酶混合液 | 4μl |
| 轻柔吹打混匀后,短暂离心,16℃保温2小时 | |
| 自备的T4 DNA聚合酶 | 2μl |
| 轻柔吹打混匀后,16℃继续保温30分钟 | |
| 0.2M EDTA溶液 | 4μl |
注:如果不需要将双链cDNA平末端化,则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μl检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片,则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常,需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。
北京现货石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒库存关键词:FFPE Total Protein Extraction Kit,石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒,BTN130888
·虾碱性磷酸酶(SAP)
编号:BTN120403
英文名称:Shrimp Alkaline Phosphatase
规格:300U
虾碱性磷酸酶与大肠杆菌来源的碱性磷酸酶同样,催化所有磷酸单酯的水解,不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解,也能催化ATP等焦磷酸键水解。但该酶与大肠杆菌来源的BAP以及小牛肠来源的CIAP 不同,通过65℃,15分钟的热处理,可使酶完全不可逆失活。
产品用途:
1.去除DNA片段的5´-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化(Self-Ligation)。
2.除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时,在反应体系中如果有多余的Primer和dNTP,将影响测序反应的正常进行。使用Exonuclease I分解残存的Primer;用SAP处理可降解多余的dNTP,之后不需要对PCR产物进行精制,立即可以进行测序反应。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 虾碱性磷酸酶(1U/μL) | 300U |
| 10×Buffer | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:在37℃、pH9.8的条件下,1分钟内水解对硝基*(代"*")磷酸盐生成1μmol的对硝基*(代"*")酚所需要的酶量定义为1个活性单位。
纯度:
1.5U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2.5U的本酶和1μg的16S,23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,RNA的电泳谱带不发生变化
使用举例:
1.在1.5mL离心管中配制下列反应液,定容至50μL。
| 成分 | 用量 |
| DNA Fragment | 1~10pmol |
| SAP(1~5μL) | 1~5U |
| 10×Buffer | 5μL |
| dH2O | up to 50μL |
2.37℃反应15~30分钟。
3.65℃反应15分钟(加热失活)。
4.加入2.5μL的3M NaCl(终浓度150mM)。
5.乙醇沉淀加入125μL(2.5倍量)的预冷无水乙醇,-20℃放置30~60分钟,离心。
6.加入200μl的70%冷乙醇清洗沉淀后,干燥。
7.TE Buffer(<20μL)溶解沉淀。
北京现货石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒库存关键词:FFPE Total Protein Extraction Kit,石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒,BTN130888
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