湿法电转液(干粉) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")湿法电转液(干粉) 蛋白质研究，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：湿法电转液(干粉) 蛋白质研究
规格：20L
英文名：Wet Transfer Buffer Powder
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本产品配制的溶液适用于湿转时，湿润、浸泡电转膜及垫子和用作电转工作缓冲液。用前直接加入蒸馏水与甲醇混匀即可。不含有机溶剂，便于储存和运输，且操作简便，一般适合分子量在100KD以上的蛋白。本产品可以回收重复使用2-3次，节约研发成本，如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

关于湿法电转液(干粉) 蛋白质研究的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
SJ0654 脂质体2000
ARB12779 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)尿液中含量检测 Mouse α1-acid glycoprotein,α1-agp ELISA KIT
51-35-4 L-Hydroxyproline  L-羟基脯*酸
ARB11033 人妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)含量检测 Human pregnancy associated plasma protein a,papp-a ELISA KIT
ARB11201 人组织相容性复合体I类相关基因D(MICD)酶免分析 Human micd  ELISA KIT
磷酸*二* D-Luciferin 3279-54-7
ARB11458 人透明质酸结合蛋白(HABP)Elisa方法检测 Human hya]uronate binding protein,habp ELISA KIT
ARB10880 人抗高尔基体抗体(AGAA)elisa检测说明书 Human anti-golgi appaRatus antibody,agaa ELISA KIT
PY02-402  CATA琼脂  100克  
BTN131232 壮观霉素溶液 Spectinomycin Solution
ARB10864 人抗核小体抗体IgG(AnuA-IgG)含量测试 Human anti-nucleosome antibody igg,anua-igG ELISA KIT
BL0923 RBITC标记羊抗人纤维蛋白原抗体
湿法电转液(干粉) 蛋白质研究关键词：BTN100928,Wet Transfer Buffer Powder,干粉,湿法电转液,湿法电转液(干粉)


·硫*(代"酸")葡聚糖
编号：BTN120643
英文名称：Dextran Sulfate
规格：1g
硫*(代"酸")葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。它是一种多聚胺，平均分子量为500000。在某些条件下5%～10%硫*(代"酸")葡聚糖效果较好，若用5%～10%PEG则可产生很高的本底。因此，使用促进剂时有必要优化条件。


储存条件：常温运输和保存、有效期一年。

·真菌RNA提取试剂盒
编号：BTN60305
英文名称：Fungal large-scale extraction kit
规格：50次
本试剂盒专门用于从常见的各种真菌和革兰氏阳性细菌中快速提取总RNA，提取过的真菌包括Candida albican，Saccharomyces cerevisiae，Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris、Aspergillus flavus等。

试剂盒特点：
1. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
2. RNA产量高，一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0×107个细胞)
3. 操作简单，整个过程只需要约30分钟。
4. 最大处理量为10mL 酵母。
5. 固体培养基上的真菌菌落也可以直接用于提取。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落或革兰氏阳性细菌)转移到1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在1.5mL塑料离心管中12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A并充分吹打混匀。如果A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5.室温 12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中.
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀30秒。
7.室温 12000～15000g离心3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
8. 加入两倍体积(约0.8-1mL)的溶液C，充分混匀。
9.室温 12000～15000g离心离心3-10分钟，RNA 将在管底形成沉淀，小心弃上清。
10. 加自备的75%乙醇，振荡器上振荡混均30秒。
11.室温 12000～15000g离心1分钟。
12.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
13. 重复 75%乙醇洗涤步骤一次。
14. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μL)。
15. 短暂放1-2分钟后加入100μl左右的RNA-free 水使RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
16. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
17. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。
18. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总RNA 有3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5 S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA/变性。使用百奥莱博优化的上样变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA
在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


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