人角膜上皮细胞

上海圻明生物公司提供的人角膜上皮细胞均来自新鲜组织，组织的采集根据美国IRB和HIPAA批准的方案进行。
发货：客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供标准的鉴定流程，保证细胞的纯度在90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
发货的新鲜细胞还包含:1、50ml完全培养基（包含生长因子和血清）；2、说明书及注意事项；

人角膜上皮细胞保存和应用：客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞，如是新鲜原代细胞，客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h，再进行后续的实验操作。如是冻存细胞，客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。
所购买细胞只可用于科研，不得用于临床应用。

细胞培养方法
1）复苏细胞：将含有人角膜上皮细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。 
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

人角膜上皮细胞RBC形态及其临床意义：  
● 正常红细胞为直径 7.2~ 7.6 mm ，厚度 2 mm 圆盘状，两面凹陷，中央较薄，着色较浅，在涂片中形态基本一致。  
● 正常 RBC 在体内能经受通过微血管的严重变形而不受损害。在高度粘稠血液中的RBC变成椭圆形，红细胞膜围绕着所含Hb旋转，像坦克的踏板（Tread）。脾脏可筛选缺乏弹性红细胞、红细胞异常变形或丧失弹性红细胞，加强对这些红细胞的清除。  
● 在贫血或有关疾病时红细胞可出现异常，往往一张较满意的血片，观察红细胞形态，对贫血的性质确定和某些疾病的诊断有一定的帮助。  
● 贫血在红细胞形态 中主要表现个体及群体大小、形状、血红蛋白浓度的差异。