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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Kit (1000 mg pimonidazole HCl plus 2 units of Rabbit IgG1 High Titer monoclonal antibody)
- 库存:
1
- 供应商:
北京博蕾德生物科技有限公司
- 规格:
1 kit
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文献和实验杂交,随后用带有荧光标记的抗DIG抗体与之反应。与双CG的探针获得杂交的标本含有甲基化,而与TG探针杂交的标本未被甲基化。通过比较斑点上荧光的强度测定甲基化水平。 这种方法的优点是快速、简便、易于掌握,可一次检测多种样本,包括石蜡包埋样本。缺点是:1. 检测序列不能过长;2. 若探针错误杂交或重亚硫酸盐处理不完全,则可能出现假阳性或假阴性结果。 2.2.12 甲基化特异性多连接依赖性探针扩(Methylation-Specific multiplex ligation-dependent
blotassay,MS-DBA) G Clément等2005年[43]报道了一种新的方法,能够定量或半定量分析样本中的甲基化水平。这个方法的过程是:先用重亚硫酸盐处理待测DNA片段,随后以非CG区的引物行PCR扩增,将扩增产物变性后转移到尼龙膜上,用3'端DIG标记的含有2个CG(或TG)的双核苷酸探针与DNA杂交,随后用带有荧光标记的抗DIG抗体与之反应。与双CG的探针获得杂交的标本含有甲基化,而与TG探针杂交的标本未被甲基化。通过比较斑点上荧光的强度测定甲基化水平。 这种方法的优点是快速、简便、易于
片加生物素化抗小鼠IgG(1:100)30min室温。 (6)PBS彻底冲洗。 (7)应用ABC复合物与等量的1%牛血清白蛋白-PBS液混合孵育1h,室温。 (8)PBS彻底冲洗。 (9)将切片覆以新鲜配制的0.025%DAB溶液,0.02%H2 O2 ,孵育3~15min。 (10)水洗,复染,脱水,透明和以甘油/PBS或DPX封固。如需要可用银染,多层ABC或PAP法加强染色效果。 三、地高辛标记cRNA探针的应用
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