- ￥6176
- Chondrex
- 美国
- 3005
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20 C
- 英文名：
Mouse Total IgE (IgEa and IgEb) Detection Kit
- 库存：
1
- 供应商：
北京博蕾德生物科技有限公司
- 规格：
1 kit
Mouse Total IgE (IgEa and IgEb) Detection ELISA Kit
背景简介：
试剂盒组分：
| 组分 | 数量 | 规格 | 保存温度 |
| IgE标准品（30051） | 1 | 100ng/瓶，冻干粉 | -20℃ |
| 捕获抗体（30052） | 1 | 0.1ml | -20℃ |
| 检测抗体（30053） | 1 | 冻干粉 | -20℃ |
| 溶液A-包被缓冲液（30054） | 1 | 10ml | -20℃ |
| 溶液B-样本、标准品缓冲液（30055） | 1 | 50ml | -20℃ |
| 溶液C-检测抗体缓冲液（30056） | 1 | 10ml | -20℃ |
| 溶液D-链亲和素-HRP缓冲液（9055） | 1 | 20ml | -20℃ |
| 链亲和素-HRP(9029) | 2 | 50ul/管 | -20℃ |
| TMB 显色液（90023） | 2 | 0.2ml | -20℃ |
| 显色液稀释液（90022） | 1 | 10ml | -20℃ |
| 洗液，20X(9005) | 1 | 50ml | -20℃ |
| ELISA 板 | 1 | 96孔（8x12） | -20℃ |
3）加入100ul稀释后的标准品和样本。
4）室温孵育2小时，洗板。
5）加入100ul稀释后的检测抗体。
6）室温孵育1小时，洗板。
7）加入100ul吸收后的链亲和素-HRP。
8）室温孵育1小时，洗板。
9）加入100ul TMB显色液
10）室温孵育25min
11)加入50ul终止液
12）读取450nm/630nm吸光度值
注意事项：
- 建议样本、标准品均做复孔检测
- 用前所有的缓冲液置于室温平衡
- 20X洗涤液低温可能会有结晶析出。如果有结晶析出，把洗涤液瓶置于温水中直至结晶完全溶解。
- 用移液器准确定量提供的缓冲液，提供额外的缓冲液。
- 每个步骤结束后，用封板膜封板，防止蒸发。
- 如果只是用部分试剂，请参照操作步骤中的用量，做相应的使用量缓冲液配制。未使用的储液在原包装管内保存，置于-20℃保存。
- 正常小鼠总IgE水平大概在50-100ng/ml,氢氧化铝佐剂免疫2周后，抗体水平提高到ug/ml。随后用抗原免疫后增加至10-20ug/ml。
1）加入包被抗体：用10ml包被抗体稀释液（Solution A）稀释1管包被抗体。或者根据用量按下表稀释。加入100ul稀释后的包被抗体液到各孔，4℃过夜孵育。剩余包被抗体储液-20℃冻存用于后续实验。
| 板条数 | 包被抗体 | 溶液A(ml) |
| 2 | 17 | 1.7 |
| 4 | 33 | 3.3 |
| 6 | 50 | 5.0 |
| 8 | 66 | 6.6 |
| 10 | 82 | 8.2 |
| 12 | 100 | 10.0 |
2.制备标准品稀释液：推荐的标准品范围是1.6-100ng/ml。用样本/标准品稀释液（Solution）1ml稀释1管标准品（100ng/管），制备100ng/mlIgE标准品储液，随后用稀释液做系列稀释，制备：100ng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml, 6.3ng/ml, 3.1ng/ml, 1.6ng/ml。剩余的标准品储液（100ng/ml）可以-20℃保存，用于后续实验。建议您每次实验室，制备新鲜标准品。
| 板条数 | 检测抗体（ul） | 溶液C(ml) |
| 2 | 8 | 1.7 |
| 4 | 17 | 3.3 |
| 6 | 25 | 5.0 |
| 8 | 33 | 6.6 |
| 10 | 42 | 8.2 |
| 12 | 50 | 10.0 |
8.洗涤：用1X稀释洗板至少三次。倒置微孔板，倒掉孔内液体，在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
9.加入链霉亲和素-HRP:用10ml链霉亲和素稀释液(Solution D)稀释1管链霉亲和素-HRP。加入100ul稀释后的链霉亲和素稀释液到各孔，室温孵育1小时。
| 板条数 | 检测抗体（ul） | 溶液C(ml) |
| 2 | 8 | 1.7 |
| 4 | 17 | 3.3 |
| 6 | 25 | 5.0 |
| 8 | 33 | 6.6 |
| 10 | 42 | 8.2 |
| 12 | 50 | 10.0 |
10.洗涤：用1X稀释洗板至少三次。倒置微孔板，倒掉孔内液体，在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
11.加入TMB:用新管制备TMB。用前10ml底物稀释液一管TMB。加入100ulTMB稀释液到各孔，室温孵育25min。
| 板条数 | TMB（ul） | 底物稀释液(ml) |
| 2 | 34 | 1.7 |
| 4 | 66 | 3.3 |
| 6 | 100 | 5.0 |
| 8 | 132 | 6.6 |
| 10 | 164 | 8.2 |
| 12 | 200 | 10.0 |
12.终止：加入50ul 2N硫酸（终止液）到各孔。
13.读板：读取450nm OD值。如果样本OD值大于标准品最高OD值，样本稀释后重新检测。630nm波长，检测的副波长。
结果计算：
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