ChonBlock Western Blot Buffer

Western-blot经验谈

哈哈,深蒙各位侠士对于兄弟的厚爱和信赖,恐怕我会令大家失望 真正做western我也做的不多,不过由于效果都不是很差,所以就对于整个过程中的某些参数对于结果的影响没有深究,正所谓真正经历实验失败的人才会对具体细节理解深刻一样,但是从关于western方面的文献和资料来看,有关各个参数对于结果的影响是有高质量的paper阐述的,所以大侠们的这些问题和想法个人认为完全是可以做出一篇小论文评述的 这两天刚好有些时间,就把曾经看的资料都大致再看了一下,自己总结了一下,可能仍然对上述大侠

操作篇：western blot 之封闭及杂交

台面上，四角用水浸湿以使保鲜膜保持平整；将抗体溶液加到保鲜膜上；从封闭液中取出膜，用滤纸吸去残留液后，将膜蛋白面朝下放于抗体液面上，掀动膜四角以赶出残留气泡；室温下孵育 1～2 h 后，用 TBST 在室温下脱色摇床上洗两次，每次 10 min；再用 TBS 洗一次，10 min。 3. 同上方法准备二抗稀释液并与膜接触，室温下孵育 1～2 h 后，用 TBST 在室温下脱色摇床上洗两次，每次 10 min；再用 TBS 洗一次，10 min，进行化学

Western blot 实验技巧精要

Western blot 实验技巧精要 ——轻松获得高质量 western blot 条带图 Western blot 方法在 SCI 文章中出现的频率非常高，漂亮的 WB 电泳图可以给文章增色不少。但是 WB 实验的步骤琐碎，细节颇多，要想得到令人满意的结果还是需要花费很多时间和精力去摸索实验技巧的。 小编经过了一段时间的努力，已经可以比较轻松的实现用 WB 方法对磷酸化蛋白计算药物的 IC50 值（见下图）。 接下来，小编将结合自己的经验以及网上可以搜索