BTN60703型3M乙酸钠溶液(pH5.2)(RNase-

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百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN60703型3M乙酸*溶液(pH5.2)(RNase-Free)库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN60703型3M乙酸*溶液(pH5.2)(RNase-Free)库存
编号：BTN60703
规格：250mL
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博

除BTN60703型3M乙酸*溶液(pH5.2)(RNase-Free)库存外，我公司正在打折促销以下产品：
59865-13-3 CYCLOSPORIN A 环孢霉素A
B0901 狗血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
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F040302 人IgG抗原 Human IgG
D-组*酸 D-Phenylalanine 351-50-8
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PY04-029  多粘菌素(II)  2.5万单位/支×10支  每支添加于100ml*化*多粘菌素B肉汤基础(SCPB)培养基中，用于副溶血性弧菌选择性增菌培养
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9008-22-4 Laminarin  昆布多糖
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·核酸清除剂
编号：BTN81216
英文名称：Nucleic Acid Scavenger
规格：1.5mL
本产品用于去除蛋白样品中的核酸污染。蛋白双向电泳的关键是制备好的样品，其中包括核酸的清除，因为核酸能与蛋白质结合，影响聚焦。同时，核酸的分子量大，容易堵塞凝胶，造成条带拖尾。此外，如果使用银染的方法检测蛋白质，污染的核酸也会被染色，为此我司开发了本产品。

产品特点：
1. 使用简单，加入样品中简单保温即可。
2. 效率高，10分钟内可以清除核酸(DNA和RNA)对蛋白质电泳的干扰。
3.基于酶学消化，所以会引入DNase和RNase。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在样品中加入0.1倍体积的本产品，轻柔混匀。
2.在冰上保温10-30分钟，使核酸降解成单核苷酸或寡核苷酸。

注意事项：
这两种酶也有可能在双向电泳图谱呈现蛋白斑点。用超离心方法也能除去核酸，但也可能除去大片分子质量的蛋白质，在低离子强度时，带负电的核酸和带正电的蛋白质会形成复合物，所以用高pH和高离子强度的溶液能减少这种反应，单最后还必需去盐。

·动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)
编号：BTN160905
英文名称：Animal RNA column extraction kit(chloroform-free)
规格：50次
本试剂盒是在本公司柱式动物总RNA快速提取试剂盒基础上升级的免*仿产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 免去*仿抽提步骤，操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. 不使用有毒的*仿，健康环保。
3. RNA纯度很高，OD260/OD280一般在2.0左右。
4.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
5.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 所得RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
7. 性价比高于进口的柱式RNA

试剂盒组成：

 

组分	编号	规格
溶液A	BTN71201A	50mL
溶液B	BTN71201B	25mL
离心吸附柱	BTN90303	50套
通用洗柱液	BTN60408	50mL
RNA洗脱液	BTN71207	10mL
使用手册		1份

储存条件：常温运输和保存，但溶液A需要4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，12000rpm室温离心3～5分钟。
3. 将上清液(残留沉淀为每裂解的细胞和组织)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
4. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
5. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
6. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
9.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入50-100μL RNA洗脱液。
11.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA专用上样液RNAload(操作详见RNAload使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
13. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。



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·菌落PCR试剂盒2.0
编号：BTN50901
英文名称：Colony PCR Kit 2.0
规格：50次
菌落PCR是筛选重组子的有效方法，可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但由于它直接以E.coli菌落为PCR而菌落中常常含有未进入细菌的、来源于连接反应的载体DNA和插入片段，所以十分容易产生假阳性。本产品针对此缺点进行了改良。

产品特点：
1. 无假阳性率，特殊的溶菌方式能有效降低菌落中未转化DNA 对PCR的干扰，使假阳性率低于5%，远低于绝大部分同类产品。
2. 简单快速，用户只需要提供PCR引物和E.coli菌落，不需要细菌培养和质粒提取,整个筛选过程从一天缩短到2-3小时，节约时间和成本。本产品与常用E.coli菌株和载体兼容。既可小规模筛选，也适用于大规模筛查。
3.高灵敏度，既可用于高拷贝质粒，也适合于低拷贝质粒。
4. PCR反应体系中含有惰性电泳染料，反映完成后可直接上样电泳，不需另加上样液。
5.处理过的菌落样品低温长期保存后仍能用于PCR 筛查。
6. 性价比高，价格跟质粒提取试剂盒相当，但节约一天时间。
 

成分	规格
溶菌液A	0.5ml
溶菌液B	0.1ml
PCR 2.0	0.75ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记1.5mL塑料离心管，除样品管外，还必须加上阳性和阴性对照管。
在每个管中加入下列成份配制100μL 溶菌液：

H2O(自备)	88μl
溶菌液A	10μl
溶菌液B	2μl
合计	100μl

2. 用无菌牙签或无菌移液枪头从培养皿上挑取一个菌落或部分菌落，放入溶菌液中，充分震荡直到菌落彻底分散混匀。为方便回查，最好在培养皿上给已取样的菌落做好标记。
3. 重复第2 步直到待筛查菌落全部转移到相应的离心管中。
4.在阳性对照管中，加入已知含有待筛选质粒的菌落；如果没有此菌落，直接进入第6 步，用连接反应液直接作PCR的阳性对照。
5.在阴性对照管中，加入已知的不含有待筛选质粒的任何E.coli菌落(如常见的宿主细菌)，其他处理同第2 步。
6. 将所有离心管置于37℃保温30分钟，然后转入100℃水浴处理10分钟。振荡混匀溶液数秒后10,000 g离心1分钟，转移上清到一新的离心管中待用。此溶液为样品DNA溶液。
7. 标记与第1 步数量相同的PCR 管，每个管中分别加入下列成份并充分混匀：

样品DNA溶液	1-5μl
PCR MagicMix	15μl
引物1(10 pmol/μL)	1μl(自备)
引物2(10 pmol/μL)	1μl(自备)
Taq物DNA聚合酶(5U/μL)	0.2-0.4μL(1-2U)
补水到	30μl

 注意:引物选择有三种情况，
 一是选用商品化的能与多克隆位点两边顺序结合的通用引物(如T7、T3、SP6等)；
 二是使用用户自己合成的能与插入片段结合的引物(如果插入片段是PCR产物，引物是现成的)；
 三是组合第一种情况和第二种情况的引物。选择前两种引物在筛查到重组子后还必须用其他方法(如质粒制备后酶切或使用载体引物/插入片段引物PCR)进一步确定插入方向。选择第三种引物则可以同时完成重组子筛选和DNA 插入方向确定两项工作。用户可以根据自己的具体情况选择。
8. 将PCR 管放入PCR 仪器中进行扩增，PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。
9. PCR结束后取10μl电泳直接进行琼脂糖电泳分析。(注：本试剂盒提供的PCR buffer中已经含有电泳染料和甘油，故可以直接上样)



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