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- 2025年10月31日
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上海三抒生物科技有限公司
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文献和实验Two-hybrid analysis of genetic
bait plasmid and a URA3 lacZ reporter plasmid like pSH18-34.The strain expressing the activation domain-tagged protein (prey strain)is EGY48 (MATa ura3 his3 leu2::3LexAop-LEU2 trp1 LYS2)transformed with the TRP1 prey plasmid.Patches of these two strains
酵母双杂交技术专题 LexA酵母双杂交系统简介 一、LexA酵母双杂交系统的设计原理 报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组 DNA上。 质粒 pLexA的筛选标志为HIS3，在双杂交系统中用于表达DNA-BD(202个氨基酸残基
去阳性克隆，保留阴性克隆。3. 酵母杂合试验(Yeast Mating)确定真阳性克隆 如下表所示，在酵母EGY48及其对应的YM4271宿主细胞中分别转入相应的质粒或文库DNA，通过杂合实验确筛选pLexA-靶DNA与pB42AD-文库确实具有相互作用的真阳性克隆。 质粒1 (in YM4271) 质粒2 (in EGY48) LacZ表型 Leu表型 pLexA pB42AD 白 不能生长 pLexA-靶DNA pB42AD 白 不能生长 pLexA pB42AD
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