bEnd.3+RFP、bEnd.3/RFP细胞、bEnd.3

细胞介绍

细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。 该细胞通过慢病毒转染的方式携带RFP基因。

细胞特性

1） 来源：BALB/c小鼠脑

2） 形态：内皮细胞样  贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

细胞筛选

该细胞为已经构建好的稳定转染RFP的细胞，随细胞传代次数的增加，其RFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 建议收到细胞后至少传3代，冻存留种后再进行筛选。

初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中，漂浮细胞大于60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药完全培养基正常培养。

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备DMEM ( 推荐iCell-128-0001含NaHCO3 1.5g/L；GIBCO,货号12800017，添加NaHCO3 1.5g/L) 培养基，优质胎牛血清，10%，双抗 1%。

注意：（bEnd.3细胞对培养基pH值的任何不平衡都很敏感。使用配方含有3.7 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基培养细胞时为稳定培养基PH值，增加CO2是必要的，否则这些细胞不会很好地附着或增殖，细胞建议在空气，90%、二氧化碳，10%环境中培养。经验证在空气，95%；二氧化碳，5%的环境下使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基会比较好，推荐使用含1.5 g / L碳酸氢钠的DMEM培养基+优质胎牛血清10%来培养。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%FBS，10%DMSO，现用现配。

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