手机验证
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100万
镜像绮点
否
细胞系
100万
细胞系
骨髓血组织
否
小鼠
否
长梭形细胞
否
骨髓血组织
冻存/复苏
长期
贴壁培养
T25
细胞详述
骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞,对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用,还能分泌多种生长因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)来支持造血。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能,能促进间充质组织的再生,如:骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织。
在骨髓中,BMSCs占骨髓有核细胞总数的0.001%~0.1%,含量极低。而同时,由于组织工程需要大量的种子细胞,从啮齿类动物骨髓分离BMSCs的技术上的难度限制了许多实验的开展。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的BMSCs对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40+GFP基因。
细胞筛选
该细胞为稳定转染GFP的细胞,随细胞传代次数的增加,其GFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。
细胞特性
1) 组织来源于实验动物的正常骨髓血组织。
2) 细胞鉴定:CD44免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。
产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1) 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2) T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
推荐培养基
我们推荐使用iCell原代间充质干细胞培养体系(产品编号:PriMed-iCELL-012)作为体外培养原代骨髓间充质干细胞的培养基。
名称 |
体积 |
浓度 |
保存条件 |
原代间充质干细胞细胞基础培养基 |
500ml |
1× |
4℃、避光 |
原代间充质干细胞培养添加剂 |
5ml |
100× |
-20℃、避光 |
胎牛血清(FBS) |
50ml |
终浓度10% |
-20℃、避光 |
双抗(青霉素/链霉素,P/S) |
5ml |
100× |
-20℃、避光 |
产品使用
1) 本产品仅能用于科研
2) 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3) 本产品未通过用于活体诊断的审核
操作流程
复苏
1将恒温水浴锅中的水预热到37℃;
2准备一支15ml离心管,加入5ml含10%FBS的完全培养基,放入37℃水浴锅中预热;
3戴上护目镜,厚毛线手套后,从液氮罐中取出要复苏的细胞,尽快转入37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率;
4将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中,混匀后,1000rpm离心5min;
5准备一个T-25培养瓶,写上细胞名称、日期,再加入4ml完全培养基;
6离心完成后弃去上清,用1ml完全培养基重悬细胞后,转入T-25细胞培养中,混匀后转入CO2培养箱中培养静置。
注意:从液氮中取出细胞冻存管时,若冻存管内有液氮进入,需拧松冻存管,排出内部残留的液氮,之后拧紧冻存管,置于干冰上,然后放入37℃水浴中,避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。
传代 (细胞传代建议一传二)
1 当细胞汇合度达到85%以上时,可进行传代。
2 在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,收集瓶内的培养基;
3 向培养瓶内加入3ml无菌的1×PBS 后,水平放置培养瓶,使PBS能够浸润到培养瓶底面上所有的面积,吸弃PBS;
4 向瓶内加入消化液1ml,浸润底面后放入37℃ CO2培养箱中孵育1~2min;
5 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起,若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml含10%FBS的完全培养基中,将悬液吸入15ml离心管;
注:如还有部分细胞未消化下来,可采用分步消化:
① 准备一个无菌的15ml离心管,加入2ml含10%FBS的完全培养基;
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和(避免吹打);
③ 向之前消化的培养瓶中加入1ml胰酶继续消化2min左右,轻拍培养瓶,95%左右细胞脱落后加入2ml含10%FBS的完全培养基中和,中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。
6 1000rpm离心5min;
7 准备两个新的T-25培养瓶,各加入4ml完全培养基。
8 离心完成后,弃上清,用2ml完全培养基重悬离心细胞,将重悬后的细胞转入2个T-25培养瓶,每个培养瓶各1ml;
9 水平放置培养瓶,震荡混匀后,将培养瓶置于37℃,5%CO2培养箱中静置培养。
冻存 (细胞冻存建议每瓶T25冻一支)
1 ( 1~6)参照传代步骤
7 离心完成后,弃上清,用1mL冻存液重悬细胞沉淀,然后转入1.8ml冻存管中;
8 将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中,之后转入-80℃冰箱中过夜降温;
9 第二天,取出降温完成的序降温盒中的冻存管,尽快转入液氮罐中保存。
注意事项
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
主要产品和技术服务:
一、原代细胞服务 各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源;
多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源;
原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等;
原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务;
二、细胞株/系服务 细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书;
细胞系培养过程的技术指导;
细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等;
三、iPS细胞 iPS细胞基础培养(有滋养层or无滋养层在);
iPS细胞增殖及冷冻保存;
iPS基础培养技术实习;
新药及实验仪器上市前评估;
四、技术外包服务:各类细胞生物学实验、分子生物学实验、显微镜拍照服务等
五、其他:根据客户需要定制服务等
镜像绮点(上海)细胞技术有限公司(子公司赛百慷)( Cellverse Bioscience Technology Co., Ltd. )是一家专注于研发生产高品质原代细胞、细胞系、干细胞以及相关生物学试剂,并提供专业生物医学技术服务外包的高新技术企业,公司总部位于上海。
镜像绮点专注于研发生产高品质的人体组织源及动物组织源的原代细胞、细胞系、iPS细胞等产品,提供以及相关的CRO,CMO服务,同时也为客户提供相关培养体系,培养基等试剂。在中国,镜像绮点除与中国科学院细胞库合作外,还与各地医学学院、机构、药企合作,其中包括:上海交通大学医学院,复旦大学医学院。
目前,镜像绮点已经建立起国内先进完备的“人类组织源原代细胞库和细胞系库”两大细胞资源库,各种种属源细胞株(系)500多种,原代细胞包括人源、鼠源、兔源、猪源、羊源以及其它动物源近700多种,3000多株现货,引进了生命科学领域的全套实验设备,建立了先进的生产研发实验室,采用了国际先进的行业技术标准、制造工艺、质检流程,保证了产品出厂的品质,公司同时更注重产品售前与售后的技术服务,着重满足客户的需求与体验。还申请了相关细胞培养试剂等十几项专利产品。正是凭借独有的原代细胞领域原创技术的优势,镜像绮点(上海)细胞技术有限公司,已经成为国内外众多生物医药企业诚信的合作伙伴和坚强的技术后盾。
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