SYA157型禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括SYA157型禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒现货价格在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

名称：SYA157型禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒现货价格
编号：SYA157
品牌：百奥莱博
等级：科研试剂

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·幽门螺旋杆菌(HP)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA095
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对幽门螺旋杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对幽门螺旋杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的幽门螺旋杆菌，用于幽门螺旋杆菌(HP)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
HP反应液(HP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
HP阳性对照(HP-PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理：
水样便1300rpm离心2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.3.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.3.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.3.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.3.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.3.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(HP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HP-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(HP-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明幽门螺旋杆菌核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明幽门螺旋杆菌核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行幽门螺旋杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明幽门螺旋杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·登革热病毒Ⅰ型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA225
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪瘟兔化弱毒疫苗与猪瘟野毒株(HCLV/wCSFV)双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA474
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副溶血性弧菌/霍乱弧菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA097
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感病毒H9亚型(AIV-H9)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA340
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·牛结核杆菌抗体ELISA检测试剂盒(筛选)
编号：SYA653
等级：科研实验专用
规格：192次/盒

·转基因植物NOS终止子单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA277
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA352
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·副溶血性弧菌TOXR/TRH双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA102
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副结核(paratuberculosis)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA503
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪传染性萎缩性鼻炎(SAR)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA441
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·诺如病毒(NV)通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA200
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒针对诺如病毒通用型高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含诺如病毒通用型基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

二、用途：
诺如病毒(Norwalk Viruses，NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。有5个基因群(Gene group G)GI、GII、GIII、GIV、GV。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。

三、试剂盒组成：(50T/Kit)
组份 数量 规格
RT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，伯乐系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
1. 采集时间：粪便样本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，此时为稀、软便，病毒排出量最多。
2. 采集方法
(1)一次流行，至少采集10例患者粪便，每份样本量约1～5mL，成形便和肛拭子诊断意义很小；
(2)病人呕吐物是粪便样本的最佳补充，有助于病原的诊断。采集、储存和运送条件同于粪便；
(3)从流行病学角度出发，在水、食物或其它外环境样本中检出NV意义重要；
(4)需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上，尽早采样并置4℃存放，若是饮用水，需用大容量(5～100L)浓集病毒后检测；
3.应避免样本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于-20℃以下过夜保存；如需长期保存，样本应冻存于-70℃以下，避免反复冻融。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(NV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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