霍乱弧菌霍乱毒素基因/毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)双重

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的霍乱弧菌霍乱毒素基因/毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)双重荧光PCR检测试剂盒(ctxA)销*(代"售")，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：霍乱弧菌霍乱毒素基因/毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)双重荧光PCR检测试剂盒(ctxA)销*(代"售")
品牌：百奥莱博
编号：SYA109
等级：科研试剂
规格：48次/盒

我公司的霍乱弧菌霍乱毒素基因/毒素共调菌毛亚单位基因(tcpA)双重荧光PCR检测试剂盒(ctxA)销*(代"售")，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·禽传染性法氏囊病病毒(IBDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA352
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA777
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌特异性引物，对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA，用于传染性胸膜肺炎放线杆菌的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR反应液(APP-PCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照 (NTC) 1管 50μL/管
阳性对照 (APP-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.4 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-凝胶配套)，并按照相应试剂盒说明操作。
6.2.1 培养物：取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出PCR反应液(APP-PCR MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(APP-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 PCR反应条件
将各反应管放入PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件：
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 35循环 94℃ for 30 sec
58℃ for 30 sec
72℃ for 30 sec

八、结果分析：
（1） 称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中，加入100mL 1×TAE电泳缓冲液，微波炉加热溶解，稍冷后加入10μL染色液混匀，倒入插有梳子的制胶板中。
（2） 待胶凝固后，取10μL Maker(推荐使用DL500 Maker)点样于左侧凝胶孔中，取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中，电压值设定为电泳槽正负极距离(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。


九、结果分析：
（1） 阴性对照(NTC)：无任何的条带(引物带除外)。
（2） 阳性对照(APP-PTC)：在80bp处有条带。
（3） 被检样品：在80bp处有条带为阳性样品，否则为阴性样品。
（4） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。



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·高致病性猪蓝耳病病毒(hp-PRRSV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA409
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·沙门菌/志贺菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA096
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪钩端螺旋体病(LPP)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA437
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对钩端螺旋体特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对钩端螺旋体的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
本试剂盒适用于检测动物内脏、血液等样本中的钩端螺旋体，用于钩端螺旋体感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
Lep反应液(Lep-qPCR MIX)	1管	672μL/管
核酸提取液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
Lep阳性对照(Lep-PTC)	1管	50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为12个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
病死动物取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结等组织1g；活动物用无菌注射器抽取3～5mL 血液。
6.2 样品前处理
每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液 100µL于 1.5mL灭菌离心管中；血液样本：取抗凝血下层血细胞 50µL，加入 100µL 双蒸水吹匀。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液)，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Lep-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶混合物	1 µL	N×1 µL
总量	15 µL	N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(Lep-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

	1循环	50℃ for 2 min
预变性	1循环	95℃ for 10 min
PCR扩增	40循环	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号 。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1）阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2）阳性对照(Lep-PTC)：均产生扩增曲线。
（3）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线，表明Lep核酸阳性。
（2）Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明Lep核酸阴性。
（3）如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4）对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行Lep 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明Lep核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1）初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2）所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3）PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4）样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5）试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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