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长期
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709
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括牛口蹄疫3ABC抗体 ELISA检测试剂盒优惠促销在内的动物疫病ELISA检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:牛口蹄疫3ABC抗体 ELISA检测试剂盒优惠促销
规格:192次/盒|480次/盒
品牌:百奥莱博
等级:科研试剂
产地:国产|进口
编号:SYA654
我公司的牛口蹄疫3ABC抗体 ELISA检测试剂盒优惠促销,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·猪圆环病毒II型抗体ELISA检测试剂盒
编号:SYA638
等级:科研实验专用
规格:192次/盒
·禽流感病毒(AIV-M)通用型单重荧光PCR检测试剂盒(定性/定量)
编号:SYA320
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
禽流感病毒实时荧光qRT-PCR检测试剂是按照美国农业部(USDA)的国际检测标准和我国《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 19438.1-2004)而制备的商业化检测试剂盒。本试剂盒为中的探针报告基团为6-FAM,淬灭基团为MGB。本方法可定性检测所有亚型禽流感病毒。
二、用途:
本试剂盒适用于检测各种禽类喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液等。可用于禽流感病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照国家标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 19438.1-2004 )进行样品的采集。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
(1) 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
(2) 每管加入600 µL裂解液,分别加入被检样本200 µL,再加入200 µL*仿,混匀器上振荡混匀5 s,于4℃ 12000 r 离心15 min。
(3) 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,加入-20℃预冷400µL异丙醇,吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中,避免吸出中间层,颠倒混匀。
(4) 于4℃ 12000 r离心15 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体;加入600µL 75%预冷乙醇,洗涤。
(5) 于4℃ 12000 r离心10 min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体。
(6) 10000 r离心10 s,用微量加样器将其吸干,室温干燥5 min~10 min。
(7) 加入10µL 无核酸降解酶的水,溶解管底的RNA,5000 r离心5 s,冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃ 冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000r离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(AIV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR扩增(PCR amplification ) 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸时收集荧光信号 。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(AIV -PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明AIV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明AIV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行AIV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明AIV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
牛口蹄疫3ABC抗体 ELISA检测试剂盒优惠促销关键词:牛口蹄疫3ABC抗体 ELISA检测试剂盒,百奥莱博,SYA654
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·木瓜转基因PRSV CP单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA286
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪流感病毒H3亚型(SIV-H3)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA445
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
·贝氏柯克斯体单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA133
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适合于检测全血等样本中的贝氏柯克斯体通用,用于贝氏柯克斯体通用感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
本试剂盒用一对贝氏柯克斯体通用特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对贝氏柯克斯体通用的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
试剂盒组成:
| 组分 | 数量 | 规格 |
| 贝氏柯克斯体反应液(qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| 贝氏柯克斯体阳性对照(PTC) | 1管 | 50μL/管 |
储存条件:-20℃以下,有效期6个月。
使用方法:
一、样品采集:
用注射器取血5mL至EDTA-2Na抗凝管,取抗凝血下层血细胞50μL,加入100μL双蒸水吹匀。
二、DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
三、检测步骤:
1.试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
| 酶混合物 | 1 µL | N×1µL |
| 总量 | 15 µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
2.qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 minPCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四、结果分析:
1.结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2.试验成立判定
➤阴性对照:不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照:均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
3.结果判定
➤在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明贝氏柯克斯体核酸阴性。
➤如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行贝氏柯克斯体 qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明贝氏柯克斯体核酸阳性;否则判为样本阴性。
五、注意事项:
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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