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Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Hoechst 33342/PI双染试剂盒(国产,进口),我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货Hoechst 33342/PI双染试剂盒(国产,进口)
英文名:Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
编号:SY0500
产地:国产|进口
Hoechst 33342/PI 双染试剂盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是:细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜,嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞,其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强,从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞,荧光强度比正常细胞要高。另外,细胞发生凋亡时染色质会固缩,从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA,并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加,这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞,即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性在早期即已丧失,可被PI染色。
经上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光+弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便,可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时,无需稀释等配制过程,也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品,每个样品的细胞数量可达105-106个。
注意事项
1) Hoechst 33342、PI对人体有害,请注意适当防护;
2) Hoechst 33342、PI需避光,整个实验过程尽量避光操作;
3) 荧光染料均存在淬灭情况,建议染色后需尽快检测;
4) Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长,一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移,导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5) 如果用于组织样品检测,则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:-20℃,有效期12个月
关于北京现货Hoechst 33342/PI双染试剂盒(国产,进口)的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
·His标签蛋白纯化预装柱
编号:SY0394
英文名称:Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
规格:5ml|1ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外,因其基质的耐压性(该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力),该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。
Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户用于纯化His-tag蛋白。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.3MPa, 3bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸(Column Size):0.7×2.5cm(1ml)
储存条件:4℃保存,有效期2年
注意事项
1)建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达蛋白为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清,0.22µm/0.45µm滤膜过滤后,置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3 样品纯化(以AKTA使用为例)
1)将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞,连接至色谱系统中,再折断下口,将预装柱连接到色谱系统中,注意旋紧。
2)3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4)利用泵或注射器上样。【注】:若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7)建议用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa),填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
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·基底膜基质胶基底胶(低生长因子)
编号:SY0465
英文名称:Matrigel, Reduced Growth Factor
规格:5ml
Matrigel基底膜/基质胶/基底胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出来的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、硫*(代"酸")乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。在室温条件下,Matrigel聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵袭和基因表达等的研究。
Matrigel基底膜/基质胶形成的三维培养基质,可促进上皮细胞、肝细胞、塞尔托利氏细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。Matrigel能影响成鼠肝脏细胞和人乳腺上皮细胞三维培养物的基因表达。同时,Matrigel可用作多种肿瘤细胞侵袭研究的基本支架,体内外血管新生研究必不可少的基质,以及体内动物模型移植瘤细胞生长的三维支架。Matrigel还能支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。
Matrigel, Reduced Growth Factor(Matrigel RGF)是低生长因子的基质胶,基于标准级别的基底膜/基质胶进一步纯化以去除其内所含的生长因子水平,包括EGF、IGF、FGF、TGF-β 等,其中TGF-β 由于偶联在胶原酶IV上和/或在纯化过程中与胶内的主要成分聚集在一起,浓度降低的相对比较少。本基质胶(低生长因子)适用于更广的细胞培养研究,包括2D/3D培养、血管生成、肿瘤细胞迁移和细胞侵袭、体内肿瘤模型建立等。特别适用于对基质成分更为严格的实验,如信号转导相关研究、阐释生长因子功能的研究或者基因表达研究等。本品为无菌制品,浓度为9-20mg/ml。
储存条件:-20℃,有效期六个月
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·(+)-脱落酸
编号:SY0619
英文名称:(+)-Abscisic acid (ABA)
规格:100mg
本品是纯化的右旋脱落酸((+)-Abscisic Acid,或S-Abscisic Acid),是天然存在且有活性的异构体。适用于植物组织培养,有效工作浓度为0.1~10 mg/L。
脱落酸(Abscisic Acid,ABA),也称为脱落素II(Abscisin II)或休眠素(dormin),是一种天然生成的植物激素和生长调节剂,参与机体内多种生理反应,包括刺激气孔关闭(水分胁迫加速ABA合成);抑制幼苗生长;诱导种子合成贮藏用蛋白;抑制赤霉素诱使α-淀粉酶从头合成的功能;影响种子休眠的发生和维持;诱导与伤口愈合相关基因转录的发生,特别是蛋白酶抑制剂的表达,这解释其在病原体防御中发挥的重要作用。总的来说,脱落酸是一种调节剂,用以控制植物对各种外界刺激做出适应性反应。
中文别名:脱落素II;离层酸;休眠素;
CAS:21293-29-8
分子式:C15H20O4
分子量:264.3
外观:白色结晶
纯度:>98%
比旋光度([α]D):+400~420
熔点:160~165℃
溶解性:溶于乙醇,碱溶液(1N KOH或1N NaOH),微溶于水
储存条件:-20℃
结构式:
·植物血凝素
编号:SY0518
英文名称:Phytohaemagglutinin M(PHA-M)
规格:5mg
植物血凝素(Phytohaemagglutinin, PHA)是一种发现于植物特别是豆科植物中的凝集素(lectin),属于高分子糖蛋白类,是低聚糖(由半乳糖,N-乙酰葡糖胺和甘露糖所构成)和蛋白质的复合物,具有促进有丝分裂和诱导干扰素分泌的活性。PHA是由4个亚基通过非共价键结合形成的四聚体糖蛋白,包含两种亚基分子,L亚基(白细胞凝集素)和E(红细胞凝集素),因此有5种异构体,分别是L4, L3E1, L2E2, L1E3和E4。L亚基具有白细胞凝集和高促有丝分裂活性;E亚基具有高红细胞凝集和低促有丝分裂活性。
目前市场上的PHA,常以PHA-L,PHA-E,PHA-M和PHA-P等形式提供。PHA-L是纯化的L4,主要功能就是作为T淋巴细胞的刺激原,广泛用于免疫学研究(如作为INF-γ ICS、ELISPOT实验的阳性对照;或作为PBMC培养的刺激物),也可以作为顺行神经示踪剂;PHA-E则是纯化的E4,主要的用途是红细胞凝集或者糖基化修饰的研究。PHA-P是在分离和纯化PHA-L和PHA-E前PHA的蛋白质形式,PHA-M是植物血凝素的粘性蛋白形式,两者成分相当,主要用于刺激外周单个核细胞增殖,促进某些细胞因子的产生和膜表面蛋白的表达。
本品为浅黄或灰褐色粉末,提取自红腰豆类植物,通过亲和色谱法纯化而成。
溶解和使用浓度
直接用无菌PBS或细胞培养液进行配制,并使用0.2 µm滤膜过滤。建议存储浓度为2-10 mg/ml,用来刺激淋巴增殖的推荐工作浓度2-10 µg/ml。
储存条件:2-8℃
我公司生产供应销*(代"售")的细胞凋亡与增殖产品正全系列现货促销,满分期待您的垂询选购北京现货Hoechst 33342/PI双染试剂盒(国产,进口)。
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