SY0648型HRP标记小鼠抗Flag-Tag单克隆抗体(D

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括SY0648型HRP标记小鼠抗Flag-Tag单克隆抗体(DYKDDDDK)北京厂家在内的一系列抗体抗原产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：SY0648型HRP标记小鼠抗Flag-Tag单克隆抗体(DYKDDDDK)北京厂家
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：HRP-conjugated Flag-Tag (DYKDDDDK), Mouse mAb
编号：SY0648
本品为HRP标记小鼠抗Flag-Tag单克隆抗体，HRP标记小鼠抗Flag标签单克隆抗体。推荐稀释比例：WB（1:1000～10000）。

标签抗原由于其分子量小，对融合蛋白的活性没有影响等特点，已被广泛应用于重组蛋白在后续免疫印迹、免疫沉淀和免疫技术的检测中。Flag标签是重组蛋白研究中应用较为广泛的一种，该标签系统利用一个短的亲水性八*基酸肽（DYKDDDDK）融合到目标蛋白的N-端或者C-端，且该标签可被后续肠激酶去除。

Flag抗体可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。

反应性：All
宿主：mouse
应用：WB
偶联物：HRP
纯化方式：亲和纯化
纯度：＞95%（SDS-PAGE）
储存缓冲液：1 mg/ml in Phosphate buffered saline (PBS) with 15 mM sodiu*(代"m") azide, pH 7.2
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。



关于SY0648型HRP标记小鼠抗Flag-Tag单克隆抗体(DYKDDDDK)北京厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒
编号：SY0327
英文名称：Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
规格：50T
细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒用于快速便捷分离细胞/组织细胞膜和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜以及高尔基体膜等上的膜蛋白。主要工作原理：通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。整个过程仅需约90min即可完成，抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。

膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。

按照说明书步骤的用量（细胞2-5×107个；组织约100mg），SY0327可分别进行50个样品的抽提，具体用量可根据不同的样品体积进行调整。

试剂盒组份：
试剂A：50ml
试剂B：15ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1）客户需自备PMSF，PMSF需现配现用，建议在抽提试剂加入到样品前2-3min加入，以防失效。
2）利用本试剂盒抽提到的细胞膜/细胞浆蛋白可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)（Yeasen Cat#20201）测定其浓度，但不适合用Bradford法测定。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
室温融解并混匀试剂A和B，融解后立即置于冰上。取适量的试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

1 样品准备
1）细胞样品
① 细胞收集
贴壁细胞：培养细胞约2-5×107个，PBS清洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
悬浮细胞：培养细胞约2-5×107个，离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
② 细胞清洗
用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5min沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1min，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
③ 细胞预处理：把1ml试剂A(含PMSF)加入至上述细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
2）组织样品
取约100mg组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1ml试剂A(含PMSF)，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15min。【注】：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

2 样品的破碎及破碎效果的鉴定
① 样品匀浆：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。【匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。】
② 通常在匀浆30次后取约2-3µl匀浆液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完整的细胞形态，说明细胞仍完整。如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞已经充分破碎，则进行下一步实验。否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。另外需注意特定的匀浆次数和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
【注】：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用反复冻融法来破碎细胞。把样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。如果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。

3 去除细胞核和未破碎的细胞
在4℃，700g离心10min，小心收集上清液至一新的离心管中。【注】：吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50µl上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液有较高的纯度。

4 沉淀细胞膜碎片
在4℃，14000g离心30min，以沉淀细胞膜碎片。

5 收集细胞浆蛋白
吸取上清至1新的离心管中，即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。吸取上清时可以有30-50µl上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。

6 抽提膜蛋白

4℃，14000g离心10sec，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。加入试剂B 200µl(如有必要，也可加大到300µl)，最高速剧烈Vortex 5sec重悬沉淀，冰浴5-10min。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5min，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。


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·考马斯亮蓝快速染色液(8分钟)
编号：SY0345
英文名称：Commassie blue fast stain solution (8 mins)
规格：1L
实验室常使用考马斯亮蓝染色法对凝胶上分离的蛋白进行染色，它既克服了*基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。目前广泛用的考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用于蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

本品是基于考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行染色而设计的，与传统染色液相比，本品为新型PAGE胶染色试剂，不含甲醇，醋酸等有毒或有刺激性物质，其独特配方使得表面活性剂剥离，蛋白固定，蛋白染色，非蛋白区域着色屏蔽等功能同时进行。8-10分钟即可完成page胶上蛋白染色，无需脱色。染色分辨率与传统染色方法分辨率相当。染色的蛋白带或蛋白点可进行高效电洗脱，适用于蛋白质谱分析。

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并带一次性手套操作。
2）用本产品4分钟即可显示出蛋白条带，加长染色时间和增加染色次数，有利于提高染色灵敏度。
3）如果凝胶面积增大或者厚度增加，增加染色液和染色时间。
4）切忌长时间高功率加热，否则会使溶液连续沸腾蒸发，造成凝胶干裂。如果不慎使凝胶干裂，可加入 50ml去离子水，高火加热1min，低火加热3-5min，可一定程度恢复干裂的PAGE胶，但染色效果有一定毁坏。

操作步骤

1. 染色工作液的配制
本品是以125×浓缩液的形式提供的，每瓶8ml。
使用前只需要取一瓶8ml的染色原液用去离子水或者蒸馏水稀释到1L，混匀后即为染色工作液，室温保存即可。

2. 染色步骤
1）剥下电泳完毕的SDS-PAGE，或native-PAGE胶，（约10×10cm，厚度小于1mm），放在比凝胶稍大的可微波炉加热的带盖塑料盒中（注意：一定要有盖以防止水汽蒸发过度）；
2） 加入50ml染色液，放入微波炉里先用高火（微波炉最大“火”）加热1分钟，取出染胶盒放在水平摇床上，中速震荡3-5min。倒掉染色液。
3）再加入50ml新的染色液高火加热1分钟，接着用低火（微波上最小“火”）加热染色3-8min。
4）倒去染色液，用清水冲洗掉残余染色液即可观察或拍照，若在旋转摇床上用清水漂洗若干次，可将残余的微弱背景彻底去除。

染色效果图



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·c-Myc Tag多肽
编号：SY0423
英文名称：c-Myc Tag Peptide
规格：5mg
c-Myc Tag多肽（c-Myc Tag Peptide）是一种合成的多肽，其*基酸序列相当于人c-Myc蛋白C-末端的410-419序列。c-Myc Tag多肽是c-Myc融合蛋白的替代品，在免疫分析实验中用于竞争性结合anti-c-Myc抗体，c-Myc Tag多肽与抗体的结合是特异性的，因此，c-Myc Tag多肽是一种温和的、理想试剂可用于洗脱与anti-Myc单抗结合的Myc-tag融合蛋白。

多肽序列（Amino acid sequence）：H-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-OH
分子式：C51H86N12O21
分子量：1203.3
外观：白色粉末
纯度：＞99%
溶解性：溶于水或1%醋酸
储存条件：2～8℃，有效期1年

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