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M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括逆转录酶 核酸扩增(PCR)在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:逆转录酶
规格:5000U
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:SY0293
英文名:M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
本品适用于第一链cDNA合成,cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性,该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA,本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶,即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,与M-MuLV相比,不仅改善了模板RNA可能被降解情况,且具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。
注意事项
1)为保证反转录成功,建议使用高质量的RNA样品。
2)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。
3)如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5min,冰上冷却,短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用方法
1第一条链cDNA合成(以20μl反应体系为例)
1.1 按照表【1】配制反应体系
RNase free ddH2O | to 20μl |
5×Reaction Buffer | 4 μl |
dNTP Mixture (10 mM each) | 1 μl |
Oligo(dT)18(0.5μg/μl) | |
or Random hexamer (0.1μg/μl) | |
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM) | 1 μl |
RNase inhibitor (40 U/μl) | 0.5 μl |
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase | 1 μl |
模板RNA | Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng |
表1 cDNA第一条链合成反应体系表 |
cDNA模板 | 2μl | 依需要调整 |
Forward Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 1μl | 0.2 μM each |
10×Taq Buffer(含Mg2+) | 5 μl | 1× |
2.5mM dNTPs | 4μl | 0.2 mM |
Taq DNA Polymerase | 0.5μl | 2.5units |
ddH2O to final volume | 50μl | / |
表2 RT-PCR反应体系表 |
编号 | 名称 |
SY0605 | 聚凝胺 |
SY0763 | 柠檬酸*抗原修复液(50×) |
SY0313 | 亮抑酶肽(超纯) |
SY0198 | E2F-GFP报告基因质粒 |
SY0104 | E2F-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
SY0446 | 红色荧光标记人源低密度脂蛋白 |
SY0083 | GATA-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
SY0497 | Hoechst 33258 DNA染料 |
SY0051 | 矿物油 |
SY0259 | 双链DNA(dsDNA)定量试剂 |
SY0196 | Myc-GFP报告基因质粒 |
SY0427 | S-Tag 多肽 |
SY0672 | 罗丹明标记山羊抗兔IgG(H+L) |
SY0310 | 磷酸酶抑制剂混合物(100×,储存液) |
SY0777 | 免疫染色用二抗稀释液 |
SY0438 | 人源乙酰化低密度脂蛋白 |
SY0673 | Alexa Fluor 594标记山羊抗兔IgG(H+L) |
SY0121 | C/EBPβ-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
SY0614 | 重组人IFN-γ |
SY0235 | 腔肠素h |
SY0593 | 溶酶体绿色荧光探针 |
SY0002 | 溶菌酶 |
SY0172 | HIF-1-GFP报告基因质粒 |
SY0170 | ISRE-GFP报告基因质粒 |
SY0304 | 乙基*基聚乙二醇 |
SY0283 | 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒 |
SY0386 | 人α-凝血酶 |
SY0627 | rac-GR24 独脚金内酯 |
SY0320 | 10×RIPA裂解液(中)(不含蛋白酶磷酸酶抑制剂) |
SY0475 | TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(FITC) |
SY0658 | 兔抗GST-tag多克隆抗体 |
SY0567 | iFluor 488标记鬼笔环肽(绿色) |
SY0602 | Alexa Fluor 488-N-羟基琥珀酰亚胺酯 |
SY0267 | 动植物组织RNA稳定液 |
SY0374 | 12%预制胶,12孔 |
SY0017 | JM109化学感受态细胞 |
SY0127 | ERRE-Luc荧光素酶报告基因质粒 |
SY0201 | PU.1-GFP报告基因质粒 |
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