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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
9个月
- 英文名:
Protein Quantitation Kit By Bradford
- 库存:
353
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖改良Bradford法蛋白定量试剂盒说明书在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:改良Bradford法蛋白定量试剂盒说明书
规格:1000次|2500次
英文名:Protein Quantitation Kit By Bradford
编号:ALH375
品牌:百奥莱博
本试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上(考马斯亮蓝结合显色法)改进而成。当Bradford染色液(考马斯亮蓝)和蛋白在酸性条件下结合时,最大吸光值波长立刻由465 nm转移至 595nm,同时颜色由褐色转为蓝色,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度。
试剂盒组份(1000次):
蛋白标准(5mg/ml BSA)—————1ml
Bradford染色液—————————200ml
产品特点:
1.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
2.检测速度极快,10-20个样品只需不足10分钟即可完成。
3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
注意事项
1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
2. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使用前请颠倒6~8 次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
3. 低温会降低Bradford 染色液的敏感度,因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室温。仅仅将需要的Bradford 染色液复温,可以减少复温时间。倒出每次需要的Bradford 染色液回复到室温,将原瓶放回冰箱。
4. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
5. 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出大致精确的蛋白浓度。
6. 需要酶标仪一台,最佳检测波长为595nm,也可以在570-610nm 之间波长测定,但会降低一些敏感度;并需96 孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整Bradford 染色液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
7. Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%,Tween 20 低于0.06%。可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
储存条件:-20℃,有效期9个月。
本品别名:改良Bradford法蛋白定量试剂盒|改进型Bradford法蛋白定量试剂盒|Bradford蛋白浓度测定试剂盒
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文献和实验发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功,或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存,需对细胞裂解液进行蛋白定量;为了判定蛋白的产量,需对纯化好的蛋白进行定量;为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记,同样需首先对蛋白样品进行定量,以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒,如BCA定量试剂盒等,操作起来,简便快捷。当然也有不少实验室,还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
目前常用比色法测定样品蛋白的含量:Bradford法(考马斯亮蓝法)、Lowry法(Folin-酚试剂法)、 BCA法等。但各有优缺点,大家可以根据具体情况选取。按相应蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。收集完蛋白样品后,为确保每个蛋白样品的上样量一致,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大,大家可以根据具体情况选取。Bradford法(考马斯亮蓝法):考马斯亮蓝G
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