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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
阴凉干燥
- 保质期:
长期
- 英文名:
Low Molecμlar Weight Protein Marker II
- 库存:
860
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖北京低分子量蛋白Marker II(14.4~116KD)促销在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:北京低分子量蛋白Marker II(14.4~116KD)促销
编号:RFT048
规格:20T(100μl)
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Low Molecμlar Weight Protein Marker II
本产品包含7种已知分子量的标准蛋白质组成,分子量范围为14.4kD-116kD,可以用来判断 SDS-PAGE未知蛋白的分子量。本成品由于含有SDS,不适于非变性胶蛋白电泳(Native PAGE)。
使用说明:
1、第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用。
2、-20℃取一管样品,彻底融化,95℃处理5分钟后立即上样。
注:
a.一次热处理后,未用尽样品-20℃保存;下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样,可以不用再加热处理。然而,如出现带型缺失现象或样品聚集在分离胶上沿,可在Marker中加入终浓度为50mM的DTT,95℃处理5分钟后再上样。
b.上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
3、电泳结束后,染色,观察结果。
注:使用银染时,由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法,可以适当降低Marker上样量。
储存条件:-20℃。
除北京低分子量蛋白Marker II(14.4~116KD)促销外,我公司正在打折促销以下产品:
·细菌基因组DNA提取试剂盒
编号:RFT037
英文名称:Bacterial genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁;蛋白酶K能把核酸解离出来; RNaseA能去除痕量的RNA污染;离心吸附柱能够高效、专一吸附DNA,最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 100次 | 贮存方式 |
| 缓冲液GA | 15 ml | 30 ml | 室温 |
| 缓冲液GB | 15 ml | 30 ml | 室温 |
| 去蛋白液GD(浓缩液) | 18 ml | 36ml | 室温 |
| 漂洗液GW(浓缩液) | 25 ml | 25 ml | 室温 |
| 洗脱缓冲液EB | 15 ml | 15ml | 室温 |
| 蛋白酶K(20mg/ml) | 1 ml | 2×1 ml | -20℃ |
| 溶菌酶(5mg/ml) | 1ml | 2×1 ml | -20℃ |
| RNase A(10mg/ml) | 1ml | 1 ml | -20℃ |
| 吸附柱CG | 50个 | 100个 | 室温 |
| 收集管(2 ml) | 50个 | 100个 | 室温 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
准备工作:
1、准备55℃和70℃水浴;无水乙醇;1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA,缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取细菌培养液1–2 ml,10,000 g离心1分钟,尽量吸净上清;向细菌沉淀中加入180μl EB,旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶,室温放置10-15分钟,期间间歇混匀几次。
注:溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关,用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟,吸弃大部分上清,留下约10μl液体,彻底混匀。
注:由于余留的液体较少,彻底混匀菌体不太容易,用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底,否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA,混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K,混匀,55℃处理15-30分钟,期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注:加入蛋白酶K后会产生絮状物,消化彻底的标志是絮状物完全消失,溶液变清亮。如消化不彻底,会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液,混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB,混匀,70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌,时间应延长到60分钟)。
注:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮,应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇,充分混匀。
注:加入乙醇后会产生絮状沉淀,可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),11000g离心5分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
注:如果出现吸附柱堵塞现象,可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心2分钟,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心60秒,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW,11,000 g离心60秒,倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中,11,000 g离心2分钟。
注:此步骤非常重要,其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,11,000 g离心2分钟。
注意:
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl,体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。
DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。
储存条件:室温,有效期12个月。
北京低分子量蛋白Marker II(14.4~116KD)促销关键词:RFT048,Low Molecμlar Weight Protein Marker II,低分子量蛋白Marker II,14.4~116KD,低分子量蛋白Marker II(14.4~116KD)
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·2×GC Buffer
编号:RFT091
规格:1ml|5×1ml|10×1ml
本品用于PCR扩增复杂结构的DNA片段。本品能与各种PCR酶配合使用,能够扩增具有复杂二级结构模板(GC rich、重复序列等)的PCR片段。使用 GC Buffer 进行PCR扩增时,建议使用 Tm 值较高的引物。因此,引物最好设计在30 mer左右。使用GC Buffer扩增的GC rich 的DNA片段长度,会因GC含量不同而各有差异。由于GC Buffer和一般的PCR Buffer相比DNA变性效果较强,因此,一般的 DNA片段(GC含量低于50%的目的片段)不推荐使用2×GC buffer进行扩增。
储存条件:-20℃
·EB染色液
编号:RFT152
英文名称:EB staining solution
规格:10ml
本品是EB的水溶液,浓度为10mg/ml。EB(*化乙锭)能与核酸分子特异结合,用于观察琼脂糖或聚丙*(代"烯")酰胺凝胶中DNA或RNA分子。广泛应用于核酸电泳前后的染色以及流式细胞仪的样品染色处理等。*化乙锭(Ethidium Bromide;C21H20N3Br;分子量为394.32)含有一个可以嵌入DNA 碱基的三环平面基团。它与DNA 的结合没有碱基序列特异性。大约每2.5 个碱基插入一个*化乙锭分子。当染料分子插入后,紫外激发后呈现荧光,可以检测到10ng 的DNA 条带。
使用方法:
使用前,先离心快甩EB溶液至管底,以防开盖后EB造成的污染。
琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(预染法):
1. 按照所需浓度称取琼脂糖,加入TAE或TBE缓冲液,在微波炉中加热至彻底溶解。
2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时,加入10 mg/ml EB溶液至终浓度为0.5μg/ml (如100ml凝胶加入EB量为5μl);彻底摇匀后铺胶并插入梳子。
3. 凝固后,将梳子轻轻拔出。
4. 上样电泳,电泳结束后紫外观察。
琼脂糖电泳凝胶的制备及染色(后染法):
1. 按照所需浓度称取琼脂糖,加入TAE或TBE缓冲液,在微波炉中加热至彻底溶解。
2. 等凝胶温度降至大约50-60℃以下时,不要加入EB溶液,直接铺胶并插入梳子。
3. 凝固后,将梳子轻轻拔出。
4. 上样电泳。
5. 电泳结束后将凝胶浸泡在含有EB的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100ml 缓冲液中加入150-200μl EB溶液,混匀)染色15-20分钟;TAE或TBE缓冲液中脱色10-15分钟。
6. 紫外观察结果。
储存条件:室温避光。
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