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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
- 库存:
362
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")血液RNA提取试剂盒(含DNase I)现货供应,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:血液RNA提取试剂盒(含DNase I)现货供应
产地:国产|进口
规格:50次
品牌:百奥莱博
英文名:RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
编号:WE0197
本试剂盒适用于从新鲜全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)中提取总RNA,可处理多至1.5ml的全血,洗脱得到分子量大于200 bp的高纯度RNA,多个样品可以在1小时内同时完成。本产品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀,不含有*酚或*仿等有毒溶剂,经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物,可直接用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| Buffer RBL(10×) | 60ml |
| Buffer RL | 35ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FL及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响提取RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中,可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀,可置于于56℃水浴重新溶解。
6、本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
7、10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释,稀释后置于2~8℃保存。
操作步骤:
1、向新鲜的抗凝全血样本中,加入5倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15分钟,孵育过程中混匀两次。
注意:孵育过程中浑浊的悬液会变成透明,证明红细胞被裂解,必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
2、4℃ 2,100 rpm(~400×g)离心10分钟,小心吸弃上清。
3、向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋,充分重悬沉淀。
4、4℃ 2,100 rpm离心10分钟,小心并彻底吸弃上清。
注意:此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
5、向沉淀中加入Buffer RL(使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇),具体加量按照下表进行,涡旋混匀。
注意:如果血液不是健康人的全血,需要根据血液中白细胞的数量来确定所需Buffer RL的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解,块状沉淀消失。
| Buffer RL(μl) | 健康人类全血(ml) | 白细胞数量 |
| 350 | 小于0.5 | 多至2×106 |
| 600 | 0.5-1.5 | 2×106 至1×107 |
6、将以上所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中,12000rpm(~~13400×g)离心2分钟,收集滤液,弃掉过滤柱。
7、向滤液中加入1倍体积(600μl或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制),混匀。
注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,不会影响后续实验。
8、将上步所得溶液全部加入到吸附柱中(已装入收集管),若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
11、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
12、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
16、将吸附柱置于一个新的RNase-Free的1.5ml离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water再次洗脱,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
储存条件:室温(15~30℃)。
关于血液RNA提取试剂盒(含DNase I)现货供应的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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血液RNA提取试剂盒(含DNase I)现货供应关键词:含DNase I,WE0197,血液RNA提取试剂盒(含DNase I),RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
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血液RNA提取试剂盒(含DNase I)现货供应关键词:含DNase I,WE0197,血液RNA提取试剂盒(含DNase I),RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
·土壤基因组提取试剂盒
编号:WE0187
英文名称:Soil Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤、湿泥、淤泥及海河沉淀物中提取总DNA。本产品使用安全方便,单个样品操作一般可在40分钟内完成。使用本品每克土壤可获得5μg以上的DNA,片段长度主要在20-30 kb之间。本试剂盒采用独特的溶液能够有效去除杂质和腐殖酸,通过优化的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上,土壤中残留的杂质、PCR和酶反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer SW | 60ml |
| Buffer SL | 30ml |
| Buffer GLS | 30ml |
| Buffer PR(浓缩液) | 13ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
| Buffer GE | 15ml |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇,70%乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PR、GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GLS是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer SL和Buffer GLS于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、取0.1 g-0.3 g土壤样本,置于离心管(自备)中,加入1ml Buffer SW,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来)。12000rpm(~13400×g)离心1分钟,倒掉上清。
2、加入750μl的70%乙醇,涡旋振荡1分钟(须将管底的土壤震起来),12000rpm离心1分钟,倒掉上清,用移液器将余液吸尽。
3、向沉淀中加入500μl Buffer SL,涡旋振荡1-3分钟(须将管底的土壤震起来),65℃水浴20分钟(可每隔5分钟涡旋振荡5秒),12000rpm离心3分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
4、向上清液中加等体积Buffer GLS,颠倒混匀15-25次,冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意:冰上放置后液体可能会凝结,属正常现象。
5、将步骤4中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱DM中,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:若一次不能加完溶液,可分多次转入。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer PR(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置 2-5分钟, 12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中微量的残余腐殖酸可能对PCR反应产生不良影响。此时将DNA稀释5-100倍问题通常即可解决。如经稀释后的DNA仍不能有效应用于PCR反应, 请使用腐殖酸清除剂,以获得更高效的清除效果。
储存条件:室温(15~30℃)。
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文献和实验以下操作按照天根产品 DP433 血液总 RNA 提取试剂盒的说明书进行,所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品,样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备:1. 新鲜血液样品( 200 μl )2. 无水乙醇,β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器(DNase I配置),移液器及配套RNase-Free无菌枪头(200 μl ,1ml) 1.5 ml,2.0ml 离心管(RNase-free)4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机本文版权归天根生化科技
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