SABC(小鼠IgG)- FITC（POD） kit

产品内容：

封闭液（5% BSA） 10ml
Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液 100ul
SABC-FITC浓缩液 100ul
SABC-POD浓缩液 100ul
稀释液 30ml
20×DAB显色液A 1ml
20×DAB显色液B 1ml
抗荧光衰减封片剂 10ml
保存： 如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，稀释液, 20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2-8℃以方便使用。
产品简介：    本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG来源的免疫组化实验. DAB及FITC显色。    SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
操作步骤:（以石蜡切片热修复为例）1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶（如果FITC，可省掉此步）。蒸馏水洗3次。 2. 热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37 ℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。5. 根据使用量，用稀释液将bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。8. 根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。9.  DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B ，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。10. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片：    常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2（如果用FITC，刚可省掉此步）处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。对于冰冻切片：    固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。
注意事项：    如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。    如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。    因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。