RIPA裂解液(中)怎么卖

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RIPA裂解液(中)怎么卖是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多RIPA裂解液(中)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：RIPA裂解液(中)怎么卖
编号：WE0257
产地：国产|进口
规格：100ml
英文名：RIPA Lysis Buffer(Medium)
  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。经RIPA裂解液(中)提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
  RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodiu*(代"m") deoxycholate，0.1% SDS，以及sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。


注意事项：
1、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如:WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如:WE0259 蛋白酶抑制剂混合物，WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液，以此类推。

使用方法：

一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

 

细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl /孔
24孔培养板	100-200μl /孔
96孔培养板	50-100μl /孔

4、将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Medium)，吹打均匀。
4、冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Medium)，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Medium)后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
 

目录号	WE0258	WE0257
名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解强度	强	中	温和	强
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脱氧胆酸*, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脱氧胆酸* , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脱氧胆酸*	1%SDS
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

储存条件：2～8℃

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·抗β-Tubulin单克隆抗体
编号：WE0355
英文名称：Anti β-Tubulin Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
微管是细胞骨架的重要组成部分，存在于所有哺乳动物细胞。它由分子量约55kD的α微管蛋白(α-Tubulin)和β微管蛋白(β-Tubulin)组成，并以αβ异源二聚体的形式存在。其中β-Tubulin蛋白表达水平相对恒定，常被用于Western Blot检测时校正系统的内参照。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG
免疫原：人工合成人β-Tubulin C末端多肽
应用范围：
WB(1：500-5000)
IHC(1：50-500)
ELISA(需摸索最佳稀释度)
应用种属：人，小鼠，果蝇，非洲蟾蜍，袋鼠，衣藻

·抗c-Myc标签单克隆抗体
编号：WE0332
英文名称：Anti c-Myc Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的c-Myc标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的c-Myc-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成第410-419位多肽序列(EQKLISEEDL)
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(1：200-20000)

·细胞周期与凋亡检测试剂盒
编号：WE0326
英文名称：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
规格：50次
  细胞周期与凋亡检测试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒每个样品的细胞数量可以为10-100万。
  碘化丙啶是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
  本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

试剂盒组成：

组份	50次
Dyeing Buffer	22.5ml
25×Propidium Iodide，PI	750μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS、95%乙醇和RNase A。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

2、细胞固定：
取4毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时加入1毫升细胞悬液，混匀后4℃固定2小时或更长时间。固定12-24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的乙醇，以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3、PI染色液的配制：
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的PI染色液：

	1个样品	6个样品	12个样品
Dyeing Buffer	0.4ml	2.4ml	4.8ml
25×Propidium Iodide，PI	15μl	90μl	180μl
RNase A(10mg/ml，自备)	1μl	6μl	12μl

注：配制好的PI染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4、染色：
每管细胞样品中加入400μl PI染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5、流式检测和分析：
用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

储存条件：-20℃，避光保存


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·蛋白标准溶液BSA
编号：WE0274
英文名称：Protein Standard Solution(BSA)
规格：5ml

·6×DNA上样缓冲液
编号：WE0221
英文名称：6×DNA Loading Buffer
规格：10ml

·miRNA cDNA第一链合成试剂盒
编号：WE0157
英文名称：miRNA cDNA Synthesis Kit
规格：25次
  本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终合成miRNA对应的第一链cDNA。

  miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的Poly(A)修饰和逆转录效率，可以从1ng-2μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第一链。并且操作简便、快捷，可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。

试剂盒组成：

组份	25次
Tris-Hcl，1 mM，PH 8.0	1ml
E.coli Poly(A)Polymerase，5U/μl	15μl
10×Poly(A)Polymerase Buffer	80μl
ATP，10 mM	15μl
RT Primer，25μM	90μl
5×UltraRT Buffer	120μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	30μl
UltraRT	15μl
RNase-Free Water	1ml

备注：本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒(WE0158)配套使用。

自备实验材料：1ng-2μg的总 RNA，或0.1ng-1μg的小分子RNA。

注意事项：
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1、使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2、玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3、配制溶液应使用无RNase的水。
4、操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

使用方法：

A．miRNA加Poly(A)尾的过程：
1、首先根据所用RNA的量，按如下公式，用1 mM Tris(PH8.0)来稀释10 mM ATP：
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例：如果总RNA的起始用量为100ng，那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP稀释50倍(1μl的10 mM ATP加49μl的1 mM Tris，PH8.0)。
2、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25μl。
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
total RNA	Xμl	可达2μg
10×Poly(A)Polymerase Buffer	2.5μl	1×
第“1”步中稀释好的ATP	1μl	—
E.coli Poly(A)Polymerase, 5U/μl	0.5μl	2.5 U
RNase-Free Water	up to 25μl	—

注意：反应中使用的total RNA必须含有小分子RNA。

此过程也可以直接使用小分子RNA(建议加入量为2-5μl。请根据目的miRNA的丰度来确定加入量)。

3、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。37℃，孵育15分钟。此过程结束后，立刻进行第一链cDNA的合成，或于-20℃暂存。如需长期保存，建议存放于-80℃。

B．修饰后的miRNA cDNA第一链合成的过程：
1、向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入下表中试剂，至终体积20μl：
 

试剂	20μl反应体系
上述Poly(A)反应液	4μl
UltraPure dNTP Mix，10 mM each	1μl
RT Primer，25 μ M	3μl
5×UltraRT Buffer	4μl
UltraRT	0.5μl
RNase-Free Water	7.5μl

2、轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。42℃，孵育50分钟。
3、85℃，孵育5分钟，终止反应。合成的cDNA反应液可以直接进行荧光定量检测实验，也可以于-20℃保存备用。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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